分子生物学 第五章 翻译.ppt

第五章 蛋白质的合成，转运和加工 第一节 氨基酰-tRNA的形成及核糖体的作用 位点 一. 氨基酰tRNA分子的形成 氨基酸的活化 活化： aa + ATP + E* 氨基酰-AMP-E + PPi 转移： 氨基酰-AMP-E + tRNA aa - tRNA+AMP +E 二．氨酰tRNA 合成酶的鉴别功能 动力学校对（Kinetic profreading） 化学校对 （Chemical proofreading） 三 核糖体的作用位点 ⑴A位点（或称 acceptor site）可以进入 氨基酰-tRNA(aminoacyl-tRNA)。 ⑵ P位点(或称供位，donor site) 是被肽基 酰-tRNA(peptidyl-tRNA)所占据。 (3)E位点(Exit site) 脱酰tRNA(deacylated- tRNA)短暂地占据。 第二节 肽链的合成 一.在细菌中翻译的起始 ⑴IF-3是30S亚基与mRNA起始位点的特 异结合所必须的。 ⑵IF-2是特异地和起始tRNA结合并把它 带到起始复合体中。 ⑶IF-1仅作为完整的起始复合物的一部分,与30S亚基结合。它结合在A位能阻止氨酰tRNA的进入。它的定位还阻止30S和50S的结合。 2. 起始复合物的形成 (1) IF-3和核糖体30S rRNA结合 使16S RNA和mRNA的S-D顺序结合 a.使30S 保持游离 b.形成起始复合体 I (2) IF-2 + GTP + 氨酰甲硫氨酸 中间复合体。 (3) 50S+30S 复合体III，释放IF-1,IF-2。 原核生物翻译起始因子 二. 起始tRNA的特点 翻译时的第一个密码子是怎样被识别的呢？ (一)小亚基上16SrRNA3′端的六核苷酸(3′-UCCUCC-5′） 和Shine-Dalgarno顺序（5′-AAACAGGAGG-3′）互补，相互结合，使下游的AUG起始密码子定位在P位上。 (二) 核糖体结合位点也含有一个信号起始密码子（initiation codon）－AUG。 起始和延伸Met-tRNAs的区别 ⑴两种tRNA本身有差别； ⑵氨基酸的状态不同。 fMet-tRNA与Met-tRNA有什么不同？ ⑴ Met-tRNAmMet在受体臂末端的一对碱基是GC，在fMet-tRNAfMet是CA，C可以和起始因子IF-2结合。 ⑵tRNAfMet在反密码子环的茎上有3对G-C,若发生突变将会阻止其进入P位点。 ⑶tRNAfMet的反密码子环上的是A，tRNAmMet是烷基化腺嘌呤。 tRNAfMet TψC环端是A，tRNAmMet的相应位置是G，作用不清。 三真核生物蛋白质合成的起始 四. 起始时mRNA和rRNA的碱基配对 (一) 原核30S小亚基和S-D顺序的结合 在细菌中被核糖体保护的DNA区域长35-40碱基长。有2个共同的特点: ⑴含有起始密码子AUG； ⑵有一个顺序和16SrRNA近3?端的顺序互补。 (二) 真核合成起始时小亚基和 起始位点的结合 真核细胞质中的核糖体并不在编码区开始处直接和起始位点相结合。 首先识别5?端甲基化的帽子结构。 内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site, IERS) A 最适合的邻接顺序是GCC CCAUGG G 称为 Kozak顺序 第二节 肽链合成的延伸和终止 一 肽链合成的延伸 肽链的延伸可分为三个阶段： ⑴ 进位反应：主要是密码子-反密码子的 识别； ⑵ 转位反应：涉及肽链的形成； ⑶ 移位反应：tRNA和mRNA相对核糖体的移动。 (一 ) 进位反应 1. 延伸因子（elongation factor） (1) 当GTP存在时，EF-Tu呈活性状态。 (2) 当GTP水解成GDP时，EF-Tu便失活。 (3) GDP被GTP取代后，它又恢复活性。 翻译的延伸 表15-4原核生物蛋白质合成的延伸因子 因子 基因 功能 抑制剂 EF-Tu tufA,tufB