动物微生物学实验6.ppt

实验六 细菌的生化试验 一、目的要求 1．通过本试验加深对细菌生化反应原理和意义的理解； 2．掌握常规细菌生化试验操作方法。 二.原理 糖发酵试验是最常用的生化反应，在肠道细菌的鉴定上及酿造工业中鉴别培养酵母和野生酵母的一种重要方法。绝大多数微生物能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖的能力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖并产酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢、甲烷、二氧化碳等)；有些细菌只产酸不产气。如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气，伤寒杆菌能分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。酵母菌能分解葡萄糖、蔗糖生成乙醇和CO2，不能分解乳糖。 M.R试验: 某些细菌(如大肠杆菌、志贺氏菌、产气杆菌等)在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再进一步分解为乙酸、乳酸、琥珀酸等。酸类增加愈多，则使培养基中的pH值愈下降，当降至pH4.5以下时，指示剂甲基红则呈红色，即为阳性反应。如pH值高于4.5时则指示剂呈黄色，即为阳性反应。因此,在培养物中加入1滴甲基红试剂，立即可以观察到上述结果之一。 . 乙酰甲基甲醇试验(V-P反应) 某些细菌（如产气杆菌）在糖代谢过程中，利用葡萄糖．产生丙酮酸，再将丙酮酸缩合。脱羧而成为中性的乙酰甲基甲醇，该物质在碱性条件下能被空气中的氧气氧化生成二乙酰。二乙酰能与培养基中含胍基的化合物发生反应，立刻或于数分钟内生成红色化合物；即为V-P试验阳性。如果培养基含胍基太少，可加入肌酸或肌酐酸等含胍基化合物。当加入α-萘酚时也可使反应加速进行。 靛基质试验原理 某些微生物如大肠杆菌，变形杆菌，霍乱弧菌等含有色氨酸酶，能分解培养基中的色氨酸，产生靛基质(indolo)。当它与对二甲氨苯甲醛作用，形成玫瑰靛基质而呈红色 硫化氢试验原理 某些微生物(如沙门氏菌、变形杆菌等)能分解蛋白质中的含硫氨基酸(如胱氨酸，半胱氨酸等)产生硫化氢，硫化氢遇到铅盐或铁盐，则发生作用而生成黑色的硫化铅或硫化铁。 三、试剂与器材 1. 器材：恒温培养箱，接种环，酒精灯 2. 培养基及试剂：蛋白胨水培养基，柠檬酸铁铵，吲哚检验试剂，缓冲葡萄糖蛋白胨水液体培养基8管(灭菌备用)，甲基红试剂，肌酸，40%KOH液，6%α-萘酚酒精溶液,分别装有乳糖发酵液，葡萄糖发酵液，蔗糖等发酵液的试管(内装有倒置的德汉氏小管)若干支 。 3. 菌种：沙门菌，大肠杆菌 四 操作步骤（以大肠杆菌和沙门菌为例） 1、糖类发酵（分解）试验 2、V－P试验（二乙酰试验） 3、甲基红（M．R．）试验 4、淀粉水解试验 5、枸橼酸盐利用试验 6、吲哚试验 7、三糖铁试验 五 注意事项 1.培养时间要充分. 2.甲基红指示剂不可加得太多，以免影响实验结果 . 3.注意无菌操作. 六 实验结果 看下面图表. 三糖铁试验