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牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 分析营养构成？ 培养基配制原则 ⑴目的明确： ⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当 ⑶适宜的pH值： 有机碳源 异养型： 根据微生物的种类、培养目的选择原料 自养型： 不加碳源 加入缓冲剂 细菌偏碱，真菌偏酸 （CO2碳源） 生产 科研 无菌技术 1、获得纯净培养物的关键: 2、消毒与灭菌 (1)消毒： 方法: 煮沸消毒法 巴氏消毒法:如牛奶的消毒 化学药剂消毒:酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等 紫外线消毒 (不包括芽孢和孢子) 防止外来杂菌的入侵 （2）灭菌 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 微生物的接种工具 (接种环、接种针)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧 注意适用范围 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h 能耐高温的需要保持干燥的物品( 玻璃器皿) 高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min 通常用于培养基的灭菌 2.无菌范围： 实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程 酒精灯旁操作 超净工作台 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算： 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2.称量： 3.溶化： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖 牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、NaCl →琼脂 →补水定容 4.调pH、分装、封口： 5.灭菌： 6.倒平板： 培养基、培养皿 分散成单个细胞, 形成单个菌落 实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板 （二）纯化大肠杆菌 接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法 （三）将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h和24h后，观察并记录 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 101 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 ⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： 菌液 微量 移液器 ⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： b.涂布平板： 不超过0.1ml 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 滴 灼 试 涂 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 讨论:涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯 与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、 吸管要在酒精灯火焰周围；等等。 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。 问题讨论 若硝化细菌、圆褐固氮菌、不固氮的蓝藻混合在一起，我们配置什么样的培养即可以将三种微生物分离？ 碳源 氮源 能源 硝化细菌 CO2 氨 氨 圆褐固氮菌 糖类等含碳有机物 N2 有机物 不固氮的蓝藻 CO2 铵盐、硝酸盐 光 代谢类型 营养类型 能源 氢的供体 基本碳源 微生物举例 光能无机营养（光能自养型） 光 无机物 二氧化碳 蓝细菌 绿色硫细菌藻类 光能有机营养（光能异养型） 光 有机物 二氧化碳及简单有机物 紫色 非硫细菌 化能无机营养（化能自养型） 无机物 无机物 二氧化碳 硝化细菌 氢细菌 化能有机营养（化能异养型） 有机物 有机物