第七章 分子发光分析法(荧光、磷光和化学发光).ppt

第七章 分子发光分析法 一、分子荧光与磷光产生过程 luminescence process of molecular fluorescence phosphorescence 二、激发光谱与荧光光谱 excitation spectrum and fluore-scence spectrum 三、荧光的产生与分子结构关系 relation between fluorescence and molecular structure 四、影响荧光强度的因素 factor influenced fluorescence 一、荧光与磷光的产生过程 luminescence process of molecular fluorescence and phosphorescence 2.电子激发态的多重度 2.激发态→基态的能量传递途径 非辐射能量传递过程 辐射能量传递过程 二、激发光谱与荧光(磷光)光谱 excitation spectrum and fluore-scence spectrum 2.荧光光谱(或磷光光谱) 3.激发光谱与发射光谱的关系 镜像规则的解释 三、荧光的产生与分子结构的关系 relation between fluorescence and molecular structure 2.化合物的结构与荧光 （5）取代基的空间障碍对荧光也有影响（一般空间阻碍导致荧光减弱），立体异构现象对荧光强度有显著的影响（一般反式荧光强，顺式弱或无荧光）。 （6）金属螯合物的荧光 除过渡元素的顺磁性原子会发生线状荧光光谱外，大多数无机盐类金属离子，在溶液中只能发生无辐射跃迁，因而不能产生荧光。但是，在某些情况下，金属螯合物却能产生很强的荧光，并可用于痕量金属离子的测定，主要是由于螯合物中配位体的发光。一般来说，能产生这类荧光的金属离子具有硬酸型结构，如Be、Mg、Al、Zr、Th等。 四、影响荧光强度的因素 factors affecting fluorescence intensity 4.内滤光作用和自吸现象 5.溶液荧光的猝灭 一、 仪器与结构流程 instrument and general process 二、 荧光分析法和应用 fluorescence analysis and application 三、 磷光分析法的应用 phosphorescence analysis and application 一、仪器结构流程 仪器光路图 仪器框图 同步扫描技术 可获得三维光谱图的仪器 磷光检测 二、荧光分析方法与应用 2.定量依据与方法 （2）定量方法 3.荧光分析法的应用 三、磷光分析法的应用 一、基本原理 principle 二、化学发光分析的特点 characteristics 三 装置与技术 instrument and technology 一、基本原理 principle 二、特点 characteristics 三、装置与技术 instrument and technology 作业： P221，12-2，12-3 1. 特点 （1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级；为什么？ （光度法 ，检测大信号的微小差别，荧光法小背景下的荧光强度） 检测下限：0.1～0.1?g/cm-3 相对灵敏度：0.05mol/L 奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液。 （2）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱； （3）试样量少 缺点：应用范围小。为什么？ (1)定量依据 荧光强度 If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率? ： If = ? Ia 由朗-比耳定律： Ia = I0(1-10-? l c ) If = ? I0(1-10-? l c ) = ? I0(1-e-2.3? l c ) 浓度很低时，将括号项近似处理后： If = 2.3 ? I0 ? l c = Kc 标准曲线法： 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度。 比较法： 在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较。 例、还原态的NADH（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型或辅酶I还原型）是一种具有高荧光的重要的辅酵素。它在340 nm有最大吸收，在465 nm有最大发射。由标准NADH溶液得到下列荧光强度数据： 95.1 0