特殊毒性幻灯片.pptVIP

一、基本概念 1.生殖发育 生殖发育是哺乳动物衍繁种族的生理过程，其中包括生殖细胞（或称配子，即精子和卵细胞）发生、卵细胞受精、着床、胚胎形成、胚胎发育、器官发生、胎仔发育、分娩和哺乳过程。生殖发育也可称为繁殖过程。 2生殖毒性 外来化合物对生殖过程的损害作用，即生殖毒性。 3发育毒性 外来化合物对发育过程的损害作用，即发育毒性。 4.外来化合物对生殖发育损害作用特点 　　一方面生殖发育过程较为敏感。一定剂量的外来化合物对机体其它系统或功能尚未造成损害作用，但生殖发育过程的某些环节可能己经出现障碍。 另一方面外来化合物对生殖发育过程影响的范围较为广泛和深远。一般毒性作用仅表现在直接接触某种外来化合物的个体并造成损害，而外来化合物对生殖发育过程的损害，不仅直接涉及雌雄两性个体，同时还可在其第二代个体也可造成损害，而且此种损害作用甚至在第二代以后世代的个体还有所表现。 二、生殖毒性及其评定 1、生殖毒性表现 外来化合物对生殖过程的损害作用可以表现为性淡漠、性无能或各种形式的性功能减退。雌性可出现排卵规律改变、月经失调或闭经、卵巢萎缩、受孕减少、胚胎死亡、生殖力降低、不孕或不育等。雄性可表现为睾丸萎缩或坏死、精子数目减少等。 2、生殖毒性作用的评定 外来化合物对生殖过程作用的评定主要通过生殖毒性试验来进行，过去也称为繁殖试验。 生殖毒性试验可以全面反映外来化合物对性腺功能、发情周期、交配行为、受孕、妊娠过程、分娩、授乳以及幼仔断奶后生长发育可能发生的影响。 评定的主要依据是交配后母体受孕情况（受孕率）、妊娠过程情况（正常妊娠率）、子代动物分娩出生情况（出生存活率）、授乳哺育情况（哺育成活率）以及断奶后发育情况等。此外还可同时观察出生幼仔是否有畸形出现，但畸形观察主要在发育毒性评定中进行。 （一）试验方法原则 生殖毒性试验多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家兔。大鼠自然受孕率较小鼠为高，较为理想。 一般设三个剂量组，另设对照组。最高剂量组剂量应该超过预期人类实际接触水平，希望能使亲代动物出现轻度中毒，但不出现死亡或死亡率不超过10%，也不能完全丧失生育能力。低剂量组的亲代动物不应观察到任何中毒症状。另设中间剂量组应仅能出现极为轻微的中毒症状。中间剂量与高剂量和低剂量应呈等比级数。 剂量的确定可用少数动物进行预试，一般最高剂量相当于LD50的1/10左右。最低剂量可相当于最高剂量的1/30。 动物接触受试物的方式应参照人类实际接触途径。一般可混入饲料或饮水中，由动物摄取；也可采用灌胃或胶囊法。 利用大鼠或小鼠进行试验时，每组雌雄各16～20只，或雌性16～20只，雄性8～10只。 （二）试验方法  现以大鼠为例，介绍三代两窝生殖试验法和两代一窝生殖试验法： 1. 三代两窝生殖试验 大鼠断奶或出生8周后，开始喂受试物或以其它方式与受试物接触，共进行8～12周，即直到性发育成熟，相当出生后4个月左右。每周至少称体重一次，记录进食量并观察有无中毒症状或死亡。将雌雄亲代动物（F0）同笼交配，雌雄比例为1：1或2：1，直到受孕或进行3周为止。雌鼠受孕后即单笼饲养，继续接触受试物。交配3周后，如仍未受孕，则停止交配，并进行生殖器官病理学检查。 确定是否受孕的方法是每日清晨进行雌性动物阴道涂片，检查有无精子；亦可检查阴道有无阴栓出现，以确定受精日期。小鼠阴栓可在阴道口存留较长时间，但在大鼠极易脱落，次晨检查时往往在笼下粪便盘中检出。阴栓是雄鼠前列腺的分泌物精液和雌鼠阴道分泌物凝固而成，乳白色蜡块状。交配后可在阴道口外出现。发现阴栓或检出精子，即为受孕0日，也有作为受孕第1日。 亲代动物（F0）所生仔鼠为第一代（F1）。出生后应检查每窝幼仔数、死亡数以及肉眼可见幼仔畸形。 出生后第4天和第21天逐个称取重量，仔鼠断奶后，母鼠休息10天，再与雄鼠交配一次，并生出第二窝仔鼠，亲代共生出仔鼠两窝，分别为F1a 和F1b。 F1b出生后，将雄性亲鼠淘汰，雌性亲鼠继续喂受试物，直至F1b出生后21天断奶为止。 F1a断奶后观察其发育情况，不再喂受试物。 F1b断奶后，继续接触受试物8 ～12周，直到性发育成熟，选出雌雄各16～20只，按前法进行交配。 F1b所产第一窝幼仔为F2a，F2a 断奶后，其母鼠F1b休息10天，再次交配，所生幼仔为F2b，F2b 断奶后，将F1b 淘汰。F2b 交配处理方法与F1b 相同。但F2b 也可只交配一次，所产仔鼠为F3a，不再进行第二次交配，试验结束。 2．两代一窝和一代一窝生殖试验 近年来许多国家与机构多规定采用两代一窝或一代一窝试验法，我国国家环境保护局《化学品测试准则（1990年）》即采用两代生殖试验或一代生殖试验。两代一窝生殖试验法基本程序与三代两窝试验法相同，但