甘肃马鹿肌细胞生成素MyoG)基因启动子区序列.pdfVIP

甘肃马鹿肌细胞生成素（MyoG ）基因启动子区序列 克隆与分析 ※ 宋兴超 杨福合 荣 敏 邢秀梅 （中国农业科学院特产研究所吉林省特种经济动物分子生物学省部共建实验室特种经济动 物种质资源遗传改良重点开放实验室 吉林 132109 ） Cloning and Analysis of the Promoter Region Sequence of MyoG Gene in Gansu Wapiti(Cervus elaphus kansuensis) ※ SONG Xing-chao XING Xiu-mei RONG Min YANG Fu-he （Institute of Special Wild Economic Animal and Plant Science，CAAS.，Jilin 132109 ） 摘要：MyoG 基因在肌肉发生过程中具有中心调节作用。根据 GenBank 中已发表的猪、人、 小鼠和牛的MyoG 基因 5’侧翼和部分第 1 外显子序列设计 PCR 引物，用Touch-Down PCR 技 术扩增了甘肃马鹿 MyoG 基因的启动子区序列，构建了重组克隆载体 pMD18-T-MyoG，并通过 菌液 PCR 扩增、质粒限制性酶切对阳性克隆进行了鉴定、测序及生物信息学分析。结果表明， 甘肃马鹿 MyoG 基因启动子区序列长 685bp(GenBank登录号：FJ746497)，其与猪、人和小鼠 的同源序列相似性分别为 88.1%，84.9%和 82.6%，且不同物种间保守性较强。本研究为进一 步探讨甘肃马鹿 MyoG 基因的表达与调控机制奠定了基础。 关键词：甘肃马鹿；MyoG 基因；启动子区序列；克隆；序列分析 肌细胞生成素(myogenin ，MyoG)基因是肌肉调节因子(muscle regulatory factors ， MRFs)家族的成员之一，该家族是一个新发现的功能基因家族，由生肌决定因子(myogenic determining factor，MyoD) 、肌细胞生成素、生肌因子5(myogenic factor 5，Myf5)和生肌调 节因子4(MRF 4)4 个成员组成。MyoD 和MyoG 是一类肌调节蛋白，其中MyoD 代表肌源 性的发生；MyoG 诱导骨骼肌的最终分化，调控中胚层细胞分化为成肌细胞，再由成肌细胞 融合为肌纤维这一过程，在肌细胞分化过程中起着中心调节作用，是唯一不可替代的成肌调 节因子。Weintraub 等研究表，单独敲除MyoG 基因的小鼠会由于严重的骨骼肌发育缺陷而 死亡，而单独敲除其他3 个基因的小鼠，其骨骼肌均发育成功。作为一种肌细胞特异性转录 因子，MyoG 基因具有以下功能：⑴调节自身基因的表达；⑵与生肌因子其他成员相互作用， 如MyoG 基因可调节MRF4 基因的表达；⑶调节肌肉特异基因肌肉肌酸激酶、肌钙蛋白、 肌球蛋白轻链基因的表达。可见 MyoG 基因与肌肉生成相关，并最终导致产肉量和肉质的 变异。1989 年, Wright 等首先报道了该基因，随后又有大量有关该基因突变与人类疾病关系 的研究。MyoG 基因由 3 个外显子和 2 个内含子组成，所有的外显子都高度保守，目前在 GenBank 上已经报道了人、牛、羊、猪、狗、小鼠、挪威鼠、鸡、鲐鱼、斑马鱼和非洲爪蟾 等 MyoG 基因序列，并且其在一些哺乳动物如牛、羊、猪与禽类鸡、鸭以及鱼类斑马鱼、 牙鲆上的功能都有了较深入的研究，但在鹿科动物上的研究还未见报道。鉴于此，本研究对 甘肃马鹿MyoG 基因的启动子区进行了克隆和生物信息学分析，以期为鹿MyoG 基因全长 序列的克隆、结构特征分析、表达调控机制及其突变与鹿产肉性能等相关研究提供基础资料。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 血液样品 从甘肃裕固族自治县鹿场随机选取10 头3～4 岁雄性甘肃马鹿，麻醉后颈 静脉采血，经ACD 抗凝，-80 ℃保存于中国农业科学院特产研究所特种经济动物种质资源 库中备用。 1.1.2 主要试剂 蛋白酶K、Taq DNA 聚合