人VEGF165和小鼠VEGF164共同抗原表位分析及验证.pdf

中国生物制品学杂志 2012 年 8 月第 25 卷第 8 期 Chin J Biologicals August 2012 ，Vol. 25 No. 8 · · 989 · · 基础研究 人 VEGF165 和小鼠 VEGF164 共同抗原表位分析及验证 孙志 贤，王清明 刘英富 ，霍景瑞，范国才， 【摘要 】 目的 分析人 VEGF165 和小鼠 VEGF164 的共同抗原表位 ，为血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor ， VEGF）表位疫苗 的设计和验证奠定基础 。方法 分析人 VEGF165 和小鼠 VEGF164 蛋白与 KDR 结合 的关键位点 ，确定其共同 表位 。将共同表位插入到 VEGF 骨架蛋白 中，扩增含共同表位的骨架蛋白基 因，与原核表达载体 pET-24a 连接 ，构建重组表达质 粒 pET-24a-FV ，转化大肠杆菌 BL21（DE3），IPTG 诱导表达 ，表达产物经 Sephacryl S-100 凝胶柱进行纯化，纯化的蛋白进行 SDS- PAGE 分析。以纯化的表位展示蛋白免疫小鼠 ，获得免疫血清，ELISA 法测定血清效价 ，Western blot 和间接免疫荧光法检测免疫 小鼠血清对小鼠 VEGF164 和 VEGF165 的识别 。结果 人 VEGF165 和小鼠 VEGF164 共同抗原表位为 KDR 40s loop 结合区 的 EYPDEIEYIFKP ；重组表达质粒经双酶切及测序证 明构建正确 ；表位展示蛋白主要以包涵体形式表达 ，表达量 占菌体总蛋白 的 4 ；免疫血清不仅能识别 20％ ，纯度可达 92％ ；小鼠 VEGF164 和人 VEGF165 均能与小鼠免疫血清发生反应 ，血清效价达到 1 ∶ 10 表位展示蛋白 ，还能识别小鼠 VEGF164 和人 VEGF165 单体和二聚体 ，还可与人 HeLa、小鼠 B16肿瘤细胞之间存在阳性反应 ，表 明表位展示蛋白能展示 VFGF 的共同抗原表位 。结论 骨架蛋白展示 的 VEGF164 和 VEGF165 共同表位免疫小鼠后 ，能产生针 对这两个蛋白的特异免疫反应 ，证实 EYPDEIEYIFKP 表位是 VEGF164 和 VEGF165 的共同抗原表位 。 【关键词 】 血管 内皮生长因子 ；抗原表位 ；免疫 【中国图书分类号】Q501 【文献标识码 】A 【文章编号 】 1004-5503（2012）08-0989-06 Analysis and verification of common antigenic epitope of mouse vascular endothelial growth factor （VEGF ）164 and human VEGF165 LIU Ying-fu ，HUO Jing-rui ，FAN Guo-cai ，SUN Zhi-xian ，WANG Qing-ming （State Key Laboratory of Pro－ teomics ，Beijing Proteome Research Center ，Beij