micrOTOF-Q II 质谱仪使用流程.pdf

micrOTOF-Q II 液质联用高分辨质谱仪使用流程 1. 使用质谱须知 在使用质谱仪前请确认并检查以下条件： ● 仪器已经正确安装并且经过厂商工程师的检测； ● 质谱仪属于精密贵重仪器，未经专门培训人员不得擅自开启使用，更不 得随意“调校”氮气和氦气压力或更改仪器参数等； ● 检查液氮罐和氦气钢瓶是否有一定压力，以便为测试样品提供符合流速 和压力要求的氮气（喷雾气体和干燥气体）和氦气（碰撞气体）； ● 常规 ESI 源已安装完毕 ● 样品溶液必须澄清透明，不含有固体微粒，不得将粗提物直接用于测定， 以免污染毛细管。 2. 测样前仪器准备 2.1 启动 micrOTOFcontrol 软件 2.1.1. 单击桌面图标 或者通过程序目录启动 micrOTOFcontrol 软件； 软件要求输入操作人员的姓名： 1 2.1.2. 选择软件中质谱仪处于操作状态 Operation 2.1.3. 调用方法: Method - Open 药物类小分子样品选用 如 tune_low.m 蛋白酶解样品选用 如 tune_wide.m 大蛋白类样品选用 如 tune_high.m 2 2.1.4. 仪器在操作状态下Operation 稳定 20-30 分钟后即可开始仪器质 量准确度校正。 2.2. 仪器质量准确度校正 2.2.1. 药物和酶解多肽样品，选用甲酸钠溶液作为校正标准液。覆盖质量范 围 m/z90-1200；校正模式选用 Enhanced Quadratic 。 2.2.2. 蛋白质类样品选用三氟乙酸钠溶液作为校正标准液。覆盖质量范围 m/z 200-2000；校正模式选用 Quadratic 。 2.2.3. 校正液配制 甲酸钠校正液： 溶剂：异丙醇:水溶液= 1:1 并含有 0.2% 甲酸 10mM 甲酸钠校正液：1ml 1M NaOH + 99ml 溶剂 三氟乙酸钠校正液： 溶剂：50%乙氰含有 0.1%三氟乙酸钠(TFA) 10mM 甲酸钠校正液：1ml 1M NaOH + 99ml 溶剂 2.2.3. Calibration 校正界面 3 3. 测样方式 3.1 直接进样测定 对于标准品或相对较纯或混合组分较少并且不含盐的药物样品，如果仅需要进行 鉴定，可以采用直接进样方法测定。 3.1.1 样品用标准溶剂（50%H2O，50%乙腈或甲醇，0.1% 甲酸）溶解或 稀释 3.1.2 将配好的样品或标准品吸入进样器（针），将进样器（针）放置于进 样泵中。 注意：进样器（针）内不能有气泡 3.1.3 将进样器（针）直接与离子源连接（如图） 注意毛细管与注射器之间需紧密连接。进样器内不能有气泡 3.1.4 设置进样泵的流速为 120～180 微升/小时 3.2 液质联用（LC/MS）测定药物类小分子样品 采用常规液相色谱系统（色谱柱 2.1x150mm ；流速200-300uL/min ）。 启动 Hystar 软件，在Hardware Setup 选项中选用适合小分子测定的液相色谱仪模 4 块，如选用 HW_regularflow ； 选用适合测定小分子的质谱方法，如选用SmallMolecul