革兰氏染色.pptx

2 1.1细菌染色法 ★单染色法：只用一种染料染色，能清楚观察菌体大小、形态与排列，不能鉴别细菌。 ★复染色法（鉴别染色）：采用两种以上的不同染料进行先后染色，可将细菌染成不同的颜色，以便鉴别细菌。 ※抗酸染色:用于检查结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌等抗酸性细菌(※一些一旦用某些方法染色后，能够抵抗酸性酒精脱色的细菌)，阳性者为红色。 ※特殊染色：荚膜染色，芽胞染色，鞭毛染色，极体染色（用于白喉杆菌异染颗粒染色）。 1.2革兰氏染色法 革兰染色法是丹麦内科医生 Christain Gram于1884年创立的一种细菌复染色方法，已有130多年的历史，仍在广泛使用。 1.3革兰氏染色法的原理 通透性学说、等电学说、化学学说 1.3革兰氏染色的意义 鉴别细菌：把细菌分成G+和G-两大类。 选择抗菌药物：例如G+球菌对青霉素敏感,G-杆菌耐药。 了解细菌的致病机理：G+菌大多产生外毒素,G-菌产生内毒素。 革兰染色的步骤 涂片 → 干燥 → 固定→ 染色  实验器材与材料 接种环、细菌分离培养物（上次实验平板） 接种环接种针，酒精灯，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张，细菌分离培养物（上次实验平板），革兰氏染色液 2 涂片的制备 灭菌接种环 2 涂片的制备 ↑ 细菌合适 ↑ 细菌较多 ①接种环取盐水3ul×2滴,水滴间距小于2cm。 ②取菌苔少许（1mm小菌落半个）与盐水混匀，涂成大于1cm2均匀涂膜。 ③涂毕→环移至涂膜中 央侧立，待环内菌膜破裂，接种环烧灼灭菌。 2 涂片的制备 固定 Fixation 涂片smear 干燥dry ①手持载玻片一端，涂膜朝上，两个涂膜快速通过火焰外层3次，时间2～3秒钟。 ②促使菌体蛋白质凝固，固定在载玻片上，以免染色水洗的时候，细菌被水洗掉。 初染：结晶紫染液染 1min 水洗，甩干 媒染：卢戈氏碘液染1min 水洗，甩干 脱色： 95%乙醇脱色约30s 水洗，甩干 复染： 复红染液染30s 水洗，甩干 印干 油镜观检 染色 关键步骤！ 3 革兰氏染色的方法和步骤 生物安全警告 BIOHAZARD 本次实验操作，可产生几十至几百个微生物气溶胶颗粒。 气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。 实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。 实验时应坐稳，很专注，不分心，在火焰周围10～20厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话，以免感染病原菌。 THANKS