有哪些信誉好的足球投注网站- 1、本文档共25页，可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
Module2定量PCR实验设计和流程
Module 2: 定量PCR实验设计和流程
The world leader in serving science
1
定量PCR的实验设计
• 准确定量样品的三个基本要求
• 定量PCR的实验要素
• 定量PCR的实验中的误差校正
2
准确定量样品的三个基本要求
•重复性好
•准确度高
•动力学范围宽
3
1. 重复性: 曲线一致性
重复性好
40个相同样本重复
4
2. 准确度
与正确检测数据的接近程度
5
3.动力学范围
能得到高质量数据的线性范围
(范围越大越好)
6
定量PCR的实验要素
目的基因 样品
标准曲线 标准品
监控系统 阳性对照
监控污染 阴性对照
7
目的基因: 样品
模板质量：纯度和浓度
分光光度计检测：
– DNA纯度：OD260/OD280=1.8
– RNA纯度：OD260/OD280=2.0
Qubit® 荧光定量：
– 分别定量DNA、RNA及蛋白质
– 准确性、灵敏度和简便性
– Qubit® Assay (dsDNA, ssDNA, RNA, protein)
8
标准曲线:标准品
目的：生成标准曲线，建立Ct值与浓度之间的线性关系
要求：
– 绝对定量实验：标准品浓度已知
– 相对定量实验：标准品与待测样品的PCR效率一致，且接近
100%
• 试剂质量一致：模板纯度、引物和探针的Tm值、酶活性、缓
冲液成分
• 反应条件一致：循环参数相同
9
标准曲线:如何制备标准曲线
• Don’t:
• 制备3个点的2倍标准曲线
• Do:
• 推荐制备至少5个点的10倍标准曲线 (4 logs)
10
标准曲线:标准品梯度稀释方法
10倍连续梯度稀释方法：
1v原液(标
文档评论（0）