1.2《基因工程的基本操作程序》课件1.pptVIP

科目一考试 / 2016年科目一模拟考试题 DNA的基本单位－－核苷酸 基因表达载体的构建 基因表达载体的模式图 抗生素抗性基因 基因表达除含有目的基因外，还需要以下元件： 启动子 终止子 标记基因 将目的基因导入受体细胞 － 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射技术 感受态法 受体细胞 植物cell 动物cell 原核cell 植物肿瘤 * 现代生物科技专题 1.2　基因工程的基本 　　操 作 程 序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 基因工程操作的动画 目的基因的表达和检测 基因工程的基本操作程序 什么叫基因？ 基因－－有遗传效应的DNA片段。 什么叫遗传效应？ 遗传效应－－ 能转录为mRNA，继而翻译为蛋白质； 能转录为核糖体RNA； 能转录为转运RNA。 基因工程的目的基因－－ 　　从供体转移到受体的基因。 与生物抗逆性相关的基因 与优良品质相关的基因 与生物药物和保健品相关的基因 与毒物降解相关的基因 与工业所需酶相关的基因 具有调控作用的因子 …… 1、获取目的基因的方法有哪些？ 2、什么叫基因文库，它包括哪些种类？ 3、用PCR技术扩增基因需要哪些原料？ 1、人工合成 2、从基因文库中获取 3、利用PCR技术扩增 (基因比较小，序列已知) 基因文库 基因组文库 部分基因文库－－如：cDNA文库 聚合酶链式反应 目的基因的获取 人工合成目的基因 DNA合成仪 科目二考试 2016年科目二考试技巧、考试内容、考试视频 基因文库的构建 1、某科研小组发现一种新的稀有植物，为了保护基因多样性的潜在价值，简述怎样构建该植物的基因组文库。 2、某科研小组在深海发现一种强抗寒的鱼类,经研究找到了其中的抗寒基因，为了储存该抗寒基因以备利用，简述怎样构建该鱼抗寒基因的cDNA文库。 mRNA RNA－DNA杂合双链 单链DNA 双链DNA RNA病毒逆转录的过程 逆转录酶 DNA聚合酶 　为什么cDNA文库中不含启动子、内含子？ 原核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 编码区上游 编码区下游 调控遗传信息的表达 (调控序列) 转录RNA (编码序列) 编码区 非编码区 (下游) 非编码区 （上游） (与RNA聚合酶结合位点) 启动子 (转录终止标记) 终止子 原核细胞的基因结构 包括若干个 结构基因 启动子 .VS. 起始密码 /终止子 .VS. /终止密码 存在分子： 作用： DNA(基因) 启动/终止转录 mRNA 起始/终止翻译 mRNA中存在启动子/终止子的序列吗？ 编码区 非编码区 非编码区 外显子 (能编码蛋白质) 启动子 内含子 (不能编码蛋白质) 真核细胞的基因结构 上游 终止子 下游 　真核细胞的一个基因的编码区转录出mRNA前体， 需把其中的内含子切除，外显子拼接成成熟mRNA。 (结构基因) mRNA RNA－DNA杂合双链 单链DNA 双链DNA 逆转录 从基因文库获取目的基因 根据目的基因的有关信息，如： 　　基因的已知核苷酸序列； 　　基因的功能； 　　基因在染色体上的位置； 　　基因的转录产物mRNA； 　　基因的表达产物蛋白质； 　　 …… 利 用 PCR技术 扩增目的基因 （聚合酶链式反应） －体外扩增DNA 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ DNA聚合酶 DNA连接酶 DNA复制的条件： 　　　　　模板DNA、脱氧核苷酸、解旋酶、 　　　　引物酶、DNA聚合酶、DNA连接酶 引物 PCR技术 脱氧核苷酸 核糖核苷酸 dNMP dAMP dGMP dCMP dTMP NMP AMP GMP CMP UMP 核苷酸的衍生物 NDP　 、　NTP dNDP　、　dNTP 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ DNA复制的条件： 　　　　　　　　模板DNA、（dNTP）、解旋酶、 　　　　　　　引物酶、DNA聚合酶、DNA连接酶 5’ 3’ DNA聚合酶 DNA连接酶 引物 高温变性 中温延伸 低温复性 PCR 加热变性 退火复性 延伸 PCR循环 PCR技术 PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增 　1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次，理论上至少需要几个引物？ 细胞内复制 .VS. PCR扩增 DNA母链 4种　dNTP Taq DNA聚合酶 引物（2个snDNA） 温度控制 1）模板： 2）原料： 3）酶： DNA母链 4种　dNTP 解旋酶 DNA聚合酶 引物酶 DNA连接酶 DNA增殖 4）特点: 半保留复制 边解旋边复制 (不用DNA连接酶) 半保留复制 全解旋再复制 PCR扩增仪 1、基因表达载体包括哪些必需组分？ 2、将目的基因导入植物、动物、微生物细胞的方法分别有哪些？ 3、目的基因的检测有