柱状田头菇凝集素的分离纯化及其部分性质.doc

食用菌学报 2 0 0 4 . 1 1 ( 3 ) : 1 7 ~ 2 3 A c t a E d u l i s F u n g i 文章编号: 1 0 0 5 - 9 8 7 3 ( 2 0 0 4 ) 0 3 - 0 0 1 7 - 0 7 柱状田头菇凝集素的分离纯化及其部分性质 ( 刘艳如1 , 余 萍2 , 郑 怡1 1 福建师范大学生物工程学院; 2 福建师范大学化学与材料学院 , 福州 3 5 0 0 0 7 ) 摘 要: 经硫酸铵分级沉淀、活性炭柱吸附、D E A E - S e p h a r o s e F F 离子交换层析及 S e p h a de x G- 1 0 0 分子筛层析, 从柱状田头菇子实体浸出液中分离 到在 PA GE 上显 示 1 条蛋 白质染 色带的 凝集 素 A CL ( A g r o c y b e c y l i n d r a c e a le ctin) 。经 S e p h a de x G- 1 0 0 测得 A CL 分子量为 6 7 8 9 0 , 经 S D S - PA GE 测定, 其亚基分子量分别为 3 4 6 7 3 、2 0 0 0 0 和 1 3 1 8 3 。A CL 的中性 糖含 量为 5 . 8 7 % , 氨基 酸中天 冬 氨酸 含量最高, 半胱氨酸含量最低。A CL 能凝集多种动物和人的 A 、B 或 O 型红细胞, 对鼠红 细胞 的血凝活性可被 7 种单糖和 3 种双糖抑制。A CL 是一种对热较为稳定的凝集素。 关键词: 柱状田头菇; 凝集素; 提纯; 血球凝集活性; 理化特性 中图分类号: S 6 4 6 . 9 0 1 文献标识码: A 凝集素是一类具有糖结合专一性、可促使细胞凝集的蛋白质或糖蛋白, 它广泛存在于动 物、植物和微生物中[ 1 ] , 由于其独特的化学性质而被广泛应用于生物学和医学的研究领 域[ 2 , 3 ] 。尽管对凝集素的研究已有近百年的历史, 但多集中于植物, 特别是豆科植物的种子, [ 4 ] 。研究发现, 大多数大型真菌凝集素具有很强的抗 全世界仅有 5 0 多种食用菌凝集素被纯化 肿瘤活性。如双孢蘑菇凝集素具有抑制结肠癌细胞株 HT 2 9 、Co ca- 2 和乳腺癌细胞株 MCF - 7 的活性[ 5 ] , 金针菇[ 6 ] 、灵芝[ 7 , 8 ] 、口蘑[ 9 ] 凝集素具有抗肿瘤和免疫调节生理活性。为此, 扩大筛 选食用菌凝集素, 研究其性质, 可以更好地为食用菌产品的开发应用提供科学依据。 柱状田头菇 [ A g r o c y b e c y l i n d r a c e a ( D C. : F r : ) R. Ma o ir e ] 是食药兼用的菌类, 营养丰富, [ 1 0 ] 。笔 具有利尿、祛湿、健脾止泻的作用, 还具有抗衰老、降低胆固醇、防癌和抗癌的特殊功效 者以柱状田头菇子实体为材料, 分离纯化其凝集素, 并对凝集素的部分性质进行了研究, 这对 进一步阐明其生物学作用具有重要意义。 1 材料与方法 1 . 1 材料 1 . 1 . 1 柱状田头菇 柱状田头菇干品购自福州仓山程埔农贸市场。 1 . 1 . 2 实验动物 昆明鼠购自福建医科大学, 其它动物购自福州仓山程埔农贸市场。 收稿日期: 2 0 0 4 - 0 4 - 1 2 原稿; 2 0 0 4 - 0 6 - 1 4 修改稿 基金项目: 福建省教育厅资助项目/ 食用菌凝集素的研究及应用0 ( J A 0 2 1 8 5 ) 的部分内容 作者简介: 刘艳如( 1 9 6 4 - ) , 女, 1 9 8 6 年毕业于华东师范大学化学系, 理学学士, 副教授, 主要从事蛋白 质的分离、纯化 等研究, 发表主笔论文 9 篇。  1 8 食 用 菌 学 报 1 1 卷 1 . 1 . 3 供试人血 人A 、B、O 型血由福建师范大学附属医院提供。 1 . 1 . 4 试剂 阿拉伯糖、甘露糖、A- 甲基- D - 甘露糖苷为美国 S igma 公司产品, 半乳糖为美国 S e r va 公司产品。S e p h a de x G- 1 0 0 和 D E A E - S e p h a r o s e F F 为美国Ph a r ma cia 公司产品。气相色 谱级活性炭( 2 6 ~ 3 5 目) 为上海试剂公司产品, 其余试剂均为国产分析纯。 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 柱状田头菇凝集素( A CL) 的提取纯化 称取柱状田头菇子实体干品 1 0 0 g, 剪碎, 按 1 : 5 ( W/ V, g/ mL) 加入 0 . 0 5 mo l/ L 磷酸盐缓冲液( PBS , 含 0 . 1 4 m