液相色谱仪器.ppt

液相色谱基础知识 （一）色谱起源 色谱法(Chromatography)：利用组分在两相 间分配系数不同而进行分离的技术 流动相：携带样品流过整个系统的流体 固定相：静止不动的一相 液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法 适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析 液相色谱基础知识 色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。 岛津LC2010高效液相色谱仪 岛津LC2010高效液相色谱仪 一. 贮液瓶(流动相) 流动相的作用: 1.携带样品 2.分离样品 采用 “HPLC” 级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配 流动相的前处理 1. 过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其在使用无机盐配制的缓冲液时 过滤膜种类: 1.水系过滤膜 2.有机系过滤膜 3.混合系 流动相的前处理 2.脱气(用超声波) 目的：除去流动相中因溶解或混合而产生的气泡 气泡产生原因：温度上升 、 压力下降 、 溶剂混合 3.贮存： 应贮存于玻璃容器中。不能贮存在塑料容器中。 因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。 二.输液泵 作用:高压输送流动相. 种类：恒压泵 恒流泵 恒流泵按结构又可分为： 1.螺旋注射泵 2.柱塞往复泵 3.隔膜往复泵 泵的维护 1.防止固体微粒进入泵体。(流动相严格过滤) 2.防腐蚀.(流动相不应含有任何腐蚀性物质) 3.防空泵运转.(泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液) 4.防压力过高.(输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。) 5.防气泡.流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气泡，泵就无法正常工作。 三.进样器 自动进样器 手动进样器 自动进样的特点： 1、超高的进样精度 2、超快的进样速度 3、可以进行批进样 四.色谱柱 作用:分离样品 分离原理: 1.液固色谱法 2.液液色谱法 (正相和反相) 3.离子交换色谱法 4.离子对色谱法 5.排阻色谱法 四.色谱柱 填料: 多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球（包括离子交换树脂）、多孔碳等 填料粒度: 一般为3,5,7,10μm 内径: 2-5mm（常用4.6mm，国内有4mm和5mm） 柱长: 10-30cm 四.色谱柱 柱的发展方向： 更短,柱长3-10cm 填料颗粒更小,粒径2-3μm 色谱柱的使用注意点 1）避免柱压过高（根据不同的柱子要求不同） 2）柱温在40℃左右,一般不超过50 ℃ 3）一般ODS柱流动相PH使用范围为2～7.5 4) 流动相有机溶剂比例过低, 柱效下降快 5）避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。 6）应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。 色谱柱的使用注意点 7）样品进样前必须经过微孔膜过滤 8）经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。如果用缓冲溶液作为流动相，分析结束时必须先用纯水冲洗10分钟，再用甲醇-水冲洗，绝不能让缓冲溶夜留在柱子中过夜。 9）使用保护柱可延长柱子寿命。保护柱应经常更换。 柱温箱 五.检测器 检测器是HPLC仪的三大关键部件之一。其作用是把洗脱液中组分定量转变为电信号。 HPLC的检测器要求： 灵敏度高 噪音低（对温度、流量等外界变化不敏感） 线性范围宽 重复性好 适用范围广 紫外可见检测器（UV/VIS） 二极管阵列检测器（PDA） 示差检测器（RID） 电导检测器（CDD） 荧光检测器（RF） 电化学检测器（L-ECD） 质谱检测器（MS） 蒸发光散射检测器（ELSD） 六.数据处理和计算机控制系统 计算机控制系统的作用： ①采集信号、分析数据； ②控制色谱仪 基本概念和术语 1、色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线。 2、基线(base line)——经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器