分析化学第11章色谱法.ppt

(3) 检测原理 基于不同的物质具有不同的热导系数 (4) 操作条件的选择 (3) 原理 蒸气分子受激发后被离子化，在电场作用下定向运动形成离子流，然后进行放大和记录。 (4) 操作条件的选择 气体流量 载气:氢气:空气=1:1:10 气体纯度：要求高 使用温度：大于80℃ 一、概述 2. 高效液相色谱法的特点 高压：用高压泵使流动液能迅速通过色谱柱 高效：与单位长度气相柱效能比高十多倍 高灵敏度：最小检测量可达10-9 g，甚至10-11 g 高速：配备高压输液设备，流速达1ml/min。 应用范围广泛：可分析80%有机化合物 二. 高效液相色谱仪 1. 紫外检测器 (A) 固定波长的紫外检测器 (B) 可变波长的紫外检测器 (C) 光电二极管阵列检测器 2. 差示折光检测器 3. 电导检测器 三. HPLC主要分离类型及其原理 化学键合相色谱法 液固色谱法 离子交换色谱法 体积排阻色谱法 (3) 固定相 固定相应符合下列要求： 颗粒细且均匀； 传质快； 机械强度高，能耐高压； 化学稳定性好，不与流动相发生化学反应。 (4) 流动相 溶剂的种类 正相：正己烷、正庚烷、乙醚、二氯甲烷、氯仿等，己烷为主体，加入质子接受体乙醚或甲基叔丁基醚，质子给予体氯仿，偶极溶剂二氯甲烷 反相：水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、乙醇及其混合物等，以水为主体，加入质子接受体甲醇，质子给予体乙腈，偶剂溶剂四氢呋喃。 2. 液固色谱法 (1) 分离原理 以固体吸附剂为固定相、液体为流动相的液相色谱法。 硅胶为固定相时：以弱极性的正构烷烃为主体，加入二氯甲烷等中等极性溶剂调节合适的洗脱强度。 可用水对硅胶进行减活处理，或加入四氢呋喃、乙腈、甲醇、异丙醇等改性剂 (4) 应用 中等分子量的油溶性样品如油品、脂肪、芳烃等 不同极性取代基的化合物 结构异构体和几何异构体混合物的分离 3. 离子交换色谱法和离子色谱法 （2）固定相 离子交换树脂，根据功能基分为 强酸型（磺酸基团） 强碱型（季铵基） 弱酸型（羧酸） 弱碱型（伯、仲、叔胺） （3）流动相 双柱抑制型：分离阳离子，一般采用无机酸如HCl，HNO3等；分离阴离子，一般采用NaOH、NaHCO3/NaCO3。 单柱非抑制型：分离阳离子，用低浓度的HCl，HNO3等；分离阴离子，可用苯甲酸及其盐、酒石酸、柠檬酸等 ? （4）应用 分析无机阴离子的首选方法 还可用于分析无机阳离子，有机酸、碱，糖类、蛋白质等。 4. 体积排阻色谱法（SEC） （3）固定相 软质凝胶：如交联葡聚糖等，水相分离生化体系，适于低、中压操作 半刚性凝胶：较高交联度的苯乙烯、二乙烯苯共聚物，有机相洗脱，可承受10Mpa的压力 硬质凝胶：高交联度苯乙烯、二乙烯苯共聚物：凝胶渗透色谱法 多孔球形硅胶：凝胶过滤色谱法、凝胶渗透色谱法 羟基化聚醚多孔微球：凝胶过滤色谱法 ? （4）流动相 改善分离主要通过固定相来实现。流动相的选择原则是：溶解样品、与凝胶浸润、与检测器匹配、粘度小。如四氢呋喃；缓冲溶液 （5）应用 大分子的分离分析 聚合物分子量分布的测定 小分子扩散到凝胶空隙中，出峰最慢； 中等分子通过部分凝胶空隙，中速通过； 大分子被排斥在外，出峰最快； 溶剂分子小，最后出峰。 §4、高效液相色谱法 (1) 分离原理 以多孔凝胶为固定相，利用凝胶的孔径，使样品中不同分子大小的组分得以分离。可分离相对分子质量在100-105范围内的化合物，分离分子大小差要大于10%。 分离原理示意图 §4、高效液相色谱法 §4、高效液相色谱法 使用水溶液的凝胶过滤色谱法（GFC），主要用于分析多肽、蛋白质、核酸、多糖等。 使用有机溶剂的凝胶渗透色谱法(GPC)，主要用于高聚物（如聚乙烯、聚氯乙烯等）分子量的测定 (2) 分类 §4、高效液相色谱法 2．进样系统 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， §4、高效液相色谱法 进样阀 3. 分离系统——色谱柱 色谱柱是液相色谱的心脏部件 色谱柱 柱管： 固定相： 不锈钢、铝、铜等 柱长5~30cm，内径为4~5mm 常用分离柱：柱体为直型不锈钢管 §4、高效液相色谱法 4．检测系统 检测器 仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，如紫外、荧光、电化学检测器等 对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应。如示差折光，电导检测器等。 §4、高效液相色谱法 表. 液相色谱常用检测器的一般性质 2% 敏感 10－8 2×104 不可以 离子 电导 1.5% 敏感 10－12