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离心分离颗粒沉降速度 d - 颗粒直径; ρp - 颗粒密度; ρm -液体介质密度; η - 液体介质粘度; ω -旋转角速度;r -转轴中心到颗粒中心距离。 增大离心力(ω2r)可提高沉降速度,对沉降速度小的颗粒,提高转速是有效的方法。 与颗粒直径有关,大颗粒容易沉降。 与颗粒密度和介质密度之差(ρp-ρm)成正比,随介质粘度增大而减小。 * 按速度和离心力: 1、常速离心机 最大转速8000rpm(r/min),相对离心力(RCF)104g以下,用于细胞、菌体和培养基残渣等分离; 2、高速(冷冻)离心机 1×104-2.5×104rpm,相对离心力104~105g,用于细胞碎片、较大细胞器、大分子沉淀物等分离; 3、超速离心机 转速2.5-8×104rpm,相对离心力5*105g;用于DNA、RNA蛋白质、细胞器、病毒分离纯化;检测纯度;沉降系数和相对分子量测定等。 离心机的种类与用途 对于常速和高速离心机,由于所分离的颗粒大小和密度相差较大,只要选择好离心速度和时间,就能达到分离效果。超速离心的离心方法:差速离心、密度梯度离心和等密度梯度离心。 按离心机的作用方式: 斜角式 平抛式 管式 蝶式 螺旋式 多室 * 1)斜角式离心机 是一类结构最简单的实验室常用离心机 指离心管腔与转轴成一定倾角的转子; 角度越大,沉降越结实,分离效果越好, 角度越小,颗粒沉降距离短,沉降速度快,但分离效果差 颗粒在角转子中沉降时, 先沿离心力方向撞向离心管, 然后再沿管壁滑向管底, 因此管的一侧会出现颗粒沉积。 2)平抛式离心机 平抛式离心机一类结构简单的实验室常用的低中速离心机,转速一般在 3000-6000rpm。 转子活动管套内的离心管,静止时垂直挂在转头上,旋转时随着转子转动,从垂直悬吊上升到水平位置(约200—800rpm)。 颗粒在水平转子中的沉降是沿管子轴向移动。 样品便于收集,受振动和变速搅乱后对流现象小 但转头结构复杂,最高转速相对要低容量也小一些。 * 平抛式离心机转子 * 管式离心机 待处理的物料在一定压力(3×104 Pa左右)下由进料管经底部空心轴进入鼓内, 靠挡板分布于鼓的四周,并使料液迅速达到与转鼓相同的角速度。 转鼓带动物料高速旋转,在离心力下,悬浮液沿转鼓内壁向上流动的,料液在离心力场的作用下因其密度差的存在而分离。 澄清后的液相流动到转鼓上部的排液口排出。 比重大的固体微粒逐渐沉积在转鼓内壁形成 沉渣层,达到一定数量后,停机人工清除。 * 4)碟片式离心机disk-bowl centrifuge 是在管式离心机的基础上发展起来的,在转鼓中加入了许多重迭的碟片,缩短了颗粒的沉降距离,提高了分离效率。 是生物工业中应用最为广泛的一种离心机 有一个密封的转鼓,内装十至上百个锥顶角为60~100゜锥形碟片。 碟片间的距离一般为0.5-2.5mm, * 碟片式离心机工作原理 当悬浮液在动压头的作用下,经中心管流入高速旋转的碟片之间的间隙时,便产生了惯性离心力, 其中密度较大的固体颗粒在离心力作用下向上层碟片的下表面运动,而后在离心力作用下被向外甩出,沿碟片下表面向转子外围下滑, 而液体则由于密度小,在后续液体的推动下沿着碟片的隙道向转子中心流动,然后沿中心轴上升,从套管中排出,达到分离的目的 YOUR TOPIC GOES HERE your subtopics go here YOUR TOPIC GOES HERE your subtopics go here transitional page elements 发酵液的固液分离 固液分离的目的 收集胞内产物的细胞或菌体,分离除去液相 收集含生化物质的液相,分离除去固体悬浮物(细胞、菌体、细胞碎片、蛋白质的沉淀物和它们的絮凝体等)。 影响发酵液固液分离的因素 1)发酵液中悬浮离子的大小 2)发酵液的黏度viscosity : 固液分离速度通常与粘度成反比,粘度越大,固液分离越困难。影响粘度的因素: 菌体的种类和浓度(重要因素),通常丝状菌、动物或植物细胞悬浮液粘度较大,浓度增大,粘度也提高。 培养液中蛋白质、核酸大量存在:通常细胞破碎或细胞自溶后粘度增大。因此细胞破碎的程度应控制,发酵放罐时间要适宜。 培养基成分:如用黄豆粉、花生粉作氮源,淀粉作碳源,粘度都会升高。 此外,某些染菌发酵液,如染细菌,则粘度会增大。 发酵过程的不正常处理,如大量过剩的培养基和消沫油加入,都会使粘度增大。 常见的固液分离方法 (一)过滤 常规过滤 错流过滤 (二)离心分离 (三)发酵液不经固液分离直接提取分离 过 滤 filtration 过滤操作是借助于过滤介质,在一
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