实验二各种生物装片的制备.ppt

实验二、各种生物装片的制作 一. 目的与要求 1、熟练掌握各种生物装片的制作。 找同学边讲解边演示各种生物装片的制作过程 2、 学会指导学生制作其装片 3、找同学讲解生物绘图的要求并让学生初步掌握生物绘图的基本方法。 二.材料和用具 HB及2H或3H绘图铅笔、橡皮、直尺、绘图纸、铅笔刀、载玻片，盖玻片、土豆、 洋葱、显微镜。 三.实验步骤 (一).生物绘图 找同学讲解生物绘图的要求和方法 要求 1.具有高度的科学性，不得有科学性错误。形态结构要准确，比例要正确，要求真实感， 立体感，精美而美观。 2.图面要力求整洁，铅笔要保持尖锐，尽量少用橡皮。 3.绘图大小要适宜，位置略偏左，右边留着注图。 4.绘图的线条要光滑、匀称，点点要大小一致。 5.绘图要完善，字体用正楷，大小要均匀，不能潦草。注图线用直尺画出，间隔要均匀，且一般多向右边引出，图注部分接近时可用折线，但注图线之间不能交叉，图注要尽量排列整 齐。 6.绘图完成后在绘图纸上方要写明实验名称、班级、姓名、时间，在图的下方注明图名及放 大倍数。 方法 生物绘图的方法有多种，最长见的是点点衬阴法。点点衬阴法即将图形画出后，用铅笔点出圆点，以表示明暗和深浅，给予立体感。在暗处点要密，明处要疏，但要求点要均匀，点点要从明处点起，一行行交互着点，物体上的斑纹描出再点点衬阴，点点衬阴法要求不能用涂抹阴影的方法以代替点点，此点初学者要尤为注意。 （二）徒 手 切 片 法 （同学讲解并演示） 用光学显微镜观察的样品必须是透明的薄片，因此，要先把观察的材料制成透明的切片后，才能在显微镜下观察。徒手切片方法是观察植物内部构造的方法，徒手切片的重要工具是双面刀片，每次用后必须擦干净，注意保护，以免生锈。徒手切片的过程如下： 1、 材料的选择: 一般选用软硬适度的植物根，茎或叶等，材料不宜太硬也不太软。切较软的材料时，可用马铃薯、胡萝卜根或肥皂将欲切的材料夹住；一起进行切片。有些叶片亦可卷成筒状再进行切片。欲切之材料应先截成适当的段块，并削平切面，一般截面的大小以不超过3-5mm2为宜，长度2-3cm，较便于手持并进行切片。 2、方法和步骤： （1）. 切片前，在小培养皿中盛以清水，准备好毛笔，滴管和刀片等用具和欲切的材料。 （2）. 切片时用左手的三个指头拿住材料，并使材料稍突出在手指上，以免刀口损伤手指。右手持双面刀片，把刀刃放在经过削平的平面上，轻轻压住它，刀口向内，且与材料断面平行，然后以均匀的力量和平稳的动作，自左前方向右后方滑行切片，注意要用整个手臂向后拉（手腕不必用力）。切片时动作要敏捷，材料要一次切下（整个过程中应用清水湿润材料和刀面，使之润滑，否则材料容易破损）。如此连续动作，切下许多薄片后，就用湿毛笔将这些薄片轻轻移入已盛水的培养皿中备用。徒手切片时最重要的是切下一小片平而薄的组织，而并不要求切下一个完整的切片。 （3）. 用毛笔挑选最薄而透明的切片，取出放在载玻片上，制成临时装片观察；如标本有保留价值，则可再进行以下处理，制成永久标本。 A、 将切片移入小烧杯中，经50％、60％、70％各级乙醇中进行脱水及固定，每级5分钟，然后移入1％番红染液中（用70％乙醇溶液配制）中30分钟。 B、继续移入80％、90％、95％各级乙醇脱水，每级5分钟。再移入1％固绿染液（用95％乙醇配制）染色30分钟，再入95％乙醇中洗去浮色，最后进入无水乙醇脱水5分钟。 C、切片置于无水乙醇:二甲苯＝1：1的溶液中5分钟，再移入纯二甲苯中5分钟，此时组织切片呈透明状态。 D、将切片置于载玻片中央，加一滴树胶，盖上盖玻片封片，待干燥后即可使用。 徒手制片的应用和主要特点 徒手制片（徒手切片）一般指徒手用刀片（常用单面刀片）把新鲜的植物材料切成薄片的制片方法。此法在植物制片中具有十分重要的地位，是一种普遍应用的制片方法。比如在研究花芽分化、新梢、新根及叶片等解剖构造以及贮藏营养等方面时，常采用徒手切片法。此外，在进行植物组织显微化学鉴定以及制作永久制片之前，也经常先用徒手切片进行观察，以检查材料是否合乎要求而决定取舍。因此徒手制片技术是科研人员必须学习和掌握的基本技术之一。 徒手制片的主要优点是：（1）能及时观察研究植物生活组织的结构和天然色彩；（2）方法及用具简单，不需切片机等机械设备，短时间即可完成，这是其他方法所不及的；主要缺点是（3）对于微小、柔软、水分过多以及坚硬的材料，难以用徒手切成薄片；（4）对于操作不熟练者，往往切成厚薄不匀或不完整的切片。 徒手制片的方法和注意事项 徒手制片最主要的工具就是刀片，常可用单面保安刀片。要获得良好的切片，首先要保持刀口的锋利，因此在进行材料的截取、削平切面时，可以用解剖刀或用过的刀片，不要用新刀，以免钝化刀口。 切片前，先准备好一个培养皿盛好清水