淋巴细胞检测的方法和意义.doc

淋巴细胞检测的方法和意义 ——肿瘤免疫中淋巴细胞检测的意义 夏落星 200912101144 摘要：最近几年的研究发现，啮齿类动物和人类均存在CD4+，CD25+调节性T细胞，健康人中此种细胞仅占外周血CD‘+T淋巴细胞的5％～10％．调节性T淋巴细胞耗竭的小鼠导致广泛的自身免疫性疾病，提示这类T细胞亚群对于控制细胞介导的自身免疫反应发挥重要作用，这群细胞具有免疫无能和免疫抑制特性，通过与细胞直接接触发挥作用，而不依赖于其分泌的细胞因子，不仅能抑制自身免疫性疾病发生，还可能参与肿瘤免疫的调节。 关键词：淋巴细胞 免疫 T细胞 T淋巴细胞和 N K细胞是免疫系统具有重要的免疫活性细胞， 在抗肿瘤过程中发挥着重要作用。恶性肿瘤的发生和转移过程中,患者的免疫功能,尤其是抗肿瘤免疫功能减退具有重要作用.在机体抗肿瘤免疫中细胞免疫又是关键,特别是T细胞的数量减少和质量异常,可使肿瘤细胞逃逸宿主的免疫监控1试验方法 将新鲜采集的外周血收集在EDTA—K2抗凝管中，混匀后，按不同试剂盒的要求分别取100“l全血与抗体避光孵育20～30min，加入溶血素2ml，混匀后避光lOmin，1500rpm离心lOmin洗细胞，再用PBS洗2次，加入o．5ml PBS后即可上机检测。血样均保证在6小时内处理完，当日上机检测。使用Cellquest软件获取细胞和分析结果，根据FSC、SSC圈出淋巴细胞，每管获取门内细胞4000个。最后将结果用计算机录入并分析。 数据统计分析数据均以均值±标准差表示，使用SPSSIO．0软件包比较组间差异是否存在统计学意义，p05为差异有统计学意义。 通过对500份健康成人的检测，可以看出国产试剂和进口试剂的检测结果基本一致并且具有显著的相关牲，但二者CD3+CD8+％、CD3+CD4+／CD3+CD8+的差异有统计学意义，这与唐中等的报道类似可能原因在于：一，抗体的来源不同，抗体针对的抗原决定簇、亲和力、与荧光素标记结合率等存在差异，所以对部分样本的测定结果存在明显差异。二，染色、裂解红细胞、洗细胞的操作也可能使同一献血员的血在不同管的细胞数目和状态产生差异。实验中我们获取的细胞数按门内的淋巴细胞数目来定而非整个白细胞数目，在一定程度上减少了同一份血样在处理过程中产生的误差。三，流式细胞仪的操作主要依靠操作者的经验，设门以及电压、补偿、阈值等参数的调节存在一定的人为因素。本调查与已有文献调查结果的比较可以看出，不同试剂和检测方法、不同地区以及检测人群中性别、年龄、民族分布的情况对于参考值范围均有影响，样本量越大越能保证结果的准确性和可靠性。我国人口众多，民族多样，淋巴细胞免疫分型参考值的确定还需要在统一试剂、仪器的基础上对大量人群进行分析统计，是否需要按不同地区、不同民族建立各自的参考值还需进一步探索研究。 异型淋巴细胞是母细胞化的淋巴细胞， 即成熟淋巴细胞向幼稚阶段转化， 在转化过程中形成多变再次遇到抗原刺激时， 被激活开始母细胞化， 参与免 疫反应。病毒感染性疾病患者外周血异型淋巴细胞就是激活的淋巴细胞 ， 临床试验观察与研究发现， 多种病毒感染均可引起细胞免疫应答 ， 导致血液中出现大量反应性变异 T淋巴细胞和少量的 B细胞 ， 形的异型淋巴细胞。平时 T 、 B淋巴细胞处于静止期，当成异型淋巴细胞 J 。传统将异型淋巴细胞分为三型： I型( 单核细胞型) 、 I I 型( 浆细胞型) 、 Ⅲ型( 幼稚型) 。也有专家 将异型淋巴细胞分为五型，即将传统的Ⅲ型( 幼稚型) 分为幼稚淋巴细胞型和原始淋巴细胞型， 而将不能纳入上述各型不规则淋巴细胞列入V型， 一般临床上将不典型淋巴细胞统称为异型淋巴细胞。 近年研究发现， 异型淋巴细胞与多种病毒感染有关， 如 E B病毒( E B V) 、 巨细胞病毒( C MV) 、 柯萨奇病毒( C V B ) 、 腺病毒( A D V) ， 弓形体病、 药物过敏、 自身免疫性疾病、 贫血等， 其中以 E B V、 c MV感染最为明显 ( 0 ． 1 ) ， 与国外报道一致。在一些儿科疾病的血液中也常有异常淋巴细胞， 但一般只在病毒感染时才会超过 0 2 。急性传染性单核细胞增多症是由 E B病毒感染所致的急性传染病， 现代实验观察与临床研究发现 E B病毒感染者血液中可出现大量的异型淋巴细胞(0 ． 1 ) ， 对诊断具有重要意义 。异型淋 巴细胞在 肾综合征 出血热早期即可出现 ， 且逐 日增多 ， 一般在 0 ． 1～ 0 ． 2 ， 异型淋巴细胞的出现有助于流行性出血热的诊断。 CD3+T淋巴细胞：为总T淋巴细胞，反映机体细