TSK-GEL色谱柱使用中的常见故障及故障排除(中文)100921课案.ppt

Tosoh Bioscience Shanghai Co., Ltd. Tosoh Bioscience Shanghai Co., Ltd. Tosoh Bioscience Shanghai Co., Ltd. TSKGEL色谱柱使用中的常见问题及故障排除 东曹（上海）生物科技有限公司 Tosoh Bioscience Shanghai Co., Ltd. 2010.10 尺寸排阻色谱 (SEC/SW) 离子交换色谱 (IEC) 疏水反应色谱 (HIC) 亲和色谱 (AFC) 反相色谱(RPC) 正相色谱 (NPC/HILIC) 保护柱 FAQ 内容概要 HPLC SEC HIC IEC AFC BioAssist 2SWXL, 3SWXL, 4SWXL BioAssist 6PW TSKgel G2000SWXL, G3000SWXL, G4000SWXL BioAssist Phenyl TSKgel Phenyl-5PW, Ether-5PW BioAssist Chelate TSKgel Chelate-5PW, Heparin-5PW, TSKgel Blue-5PW, ABA-5PW BioAssist Q, BioAssist S TSKgel DEAE-5PW, SuperQ-5PW, TSKgel SP-5PW, CM-5PW TSKgel DEAE-NPR, SP-NPR, DNA-NPR RPC TSKgel Octadecyl-2PW, -4PW, -NPR TSKgel Phenyl-5PW RP TSKgel ODS-100V, ODS-100Z, ODS-100S, ODS-80Ts 生物分离色谱柱-TSK-GEL BioAssist 系列及其他 问题 原因和解决办法 1 样品吸附太强难以被洗脱 1 样品与色谱柱填料上的硅羟基发生离子性相互作用。 　 　 　 (a) 将缓冲液中的离子强度增加至 0.3 　 　 　 (如;含有 0.3 M NaCl的 50 mM 磷酸钠缓冲液 ,pH 6.8） 　 　 　 (b) 将pH值减少到5.5左右 　 　 　 (如;含有 0.1 M Na2SO4的 50 mM 磷酸钠缓冲液 ,pH 5.5) 　 　 2 分子量大于300K的蛋白质（或多聚体及二聚体）有可能发生非特异性吸附（疏水）。 　 　 　 (a) 在实际分析之前先进样数次（总共上样约1mg左右，如：质粒样品） 　 　 　 这种现象会发生在第一次使用新柱子时。 　 3 疏水分子（如多肽）间发生疏水相互作用。 　 (a) 在流动相中添加一些有机溶剂，如：乙腈 (低于 50 %) 　 　 　 (如;含有 40%乙腈的 50 mM 磷酸钠缓冲液 ,pH 6.8) 2 样品的洗脱越来越迟缓 1 在劣化的色谱柱填料上发生了离子相互作用。 　 　 　 (a)将缓冲液中的离子强度增加至 0.5 (0.5 M NaCl), 或降低缓冲液的pH值。 　 　 　 完全恢复色谱柱的功能是不可能的。 使用pH值小于7的缓冲液。 　 　 2 发生疏水性吸附的杂质造成色谱柱堵塞。 　 　 　 (a) 参照操作手册添加有机溶剂清洗色谱柱 　 　 　 (b) 安装保护柱并适时更换 注; PW 系列的色谱柱有时也会和SW系列一样发生疏水性吸附的问题。 故障排除：尺寸排阻色谱柱 (SW) Conditions Column: TSKgel G3000SWXL (7.8 mm I.D. x 30 cm) Eluent: A; 0.3 mol/L NaCl in 50 mmol/L sodium phosphate buffer, pH 6.7 B; 0.1 mol/L Na2SO4 in 50 mmol/L sodium phosphate buffer, pH 5.0 Flow rate: 1.0 mL/min Temperature: 25 C Detection: UV (280nm) * Allows indicate albumin peaks SEC分离中的改进的分辨率-流动相的影响 (pH) 　 　 　 另一方面，不稳定的（非重复的）鬼峰与仪器的不稳定有关系。 　 　 峰高取决于平衡时间 (杂质含量) 　 　 鬼峰甚至重复出现在空白梯度的同一洗脱位置。 　 　 (a) 使用高纯度的溶剂 （ phosphate, Tris, Guanidine/HCl等） 　 　 流动相中的离子性杂质聚集并被洗出。 1 在线性梯度的同一洗脱位置重复出现鬼峰 5 (b) pH 梯度应该在由