荧光原位杂交FISH)实验知识.pdf

荧光原位杂交实验技术 Fluorescence In Situ Hybridization(FISH) 主讲人：Micro 广州伯信生物科技有限公司 • FISH分类及应用 • FISH 与其他技术的整合使用 • FISH 探针种类及制备 • 荧光原位杂交(Fluorescence in situ Hybridization,FISH) 原位杂交是在组织、细胞或染色体等水平对DNA或RNA进行定 性、定位或定量分析的实验技术 原位杂交的探针按标记分子类型分为放射性标记和非放射性标记 FISH技术是在同位素标记探针的基础上改进而来，是一种重要 的非放射性原位杂交技术 利用荧光素或者半抗原（生物素、地高辛）等非放射性物质标记 探针 FISH 分类 • 检测分子 DNA FISH RNA FISH 标本类型 标记颜色 DNA FISH Q-FISH standard RNA FISH 间期染色体FISH 单色FISH RNA FISH CO-FISH Stellaris RNA FISH 中期染色体FISH 双色FISH CARD-FISH QuantiGene ViewRN A FISH Fiber-FISH 染色体纤维FISH 多色FISH LNA-FISH M-FISH QM-FISH FISH 应用 1 • 基因（或DNA片段）的染色体定位； • 染色体数目与结构异常的检测； • RNA表达的定性、定位或定量分析； • 检测目标： 利用多色荧光原位杂交技术精确、快速确定检测基因与端粒、染 色体带及着丝粒的关系，从而简化基因物理图谱构建程序 • 检测方法： 端粒、着丝粒、特异性基因探针 FISH 应用 2 • 基因（或DNA片段）的染色体定位； • 染色体数目与结构异常的检测； • RNA表达的定性、定位或定量分析； • 染色体畸变类型 一 染色体数目异常 整倍体改变（euploid ） • 三倍体（triploid ） ：具有3个染色体组，染色体总数为69 （3n • 四倍体（tetraploid ）：具有4个染色体组，染色体总数为92 （ 4n ） 非整倍体改变（aneupliod ） • 亚二倍体（hypodiploid ）:体细胞中染色体数目少了一条或数条 染色体，也称单体综合征。 • 超二倍体（hyperdiploid ）：体细胞中染色体数目多了一条或数 条，例如三体综合征。 12/9/2013 • 染色体畸变类型 二 染色体结构畸变 缺失（ interstitial deletion，del ） 重复（duplication，dup ）