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菌种鉴定方法及手段 真菌检测细菌检测/ 菌种鉴定一般就只要提取基因组DNA，然后PCR扩增 16srDNA片段，上GeneBank 或 Eztaxon对比即可。一般序列相似度在97%以上就可以认为是同种细菌。 常规鉴定 常规鉴定内容有形态特征和理化特性。形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包 括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应和血清学反应等。 自动鉴定 BIOLOG鉴定系统以微生物对不同碳源的利用情况为基础，检测微生物的特征指纹图 谱，建立与微生物种类相对应的数据库。通过软件将待测微生物与数据库参比，得出鉴定结 果。该系统已获美国FDA认可，已逐步应用于食品和饮品企业、环保、海洋生物/水产品、 制药、农业微生物、生物治理、化妆品、临床等领域的微生物鉴定试验中。拥有国内最全的 BIOLOG数据库，涉及革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、厌氧菌、酵母、丝状真菌在内近2000 种微生物。 分子生物学鉴定 应用分子生物学方法从遗传进化角度阐明微生物种群之间的分类学关系，是微生物分类 学研究普遍采用的鉴定方法。科标生物检测中心拥有微生物菌种分类鉴定的分子生物学实验 室，配有PCR仪、高速冷冻离心机、电泳仪、HPLC、凝胶成像系统、紫外控温分析系统等 先进仪器设备，以及DNAMAN、BIOEDIT、CLUSTALX、TREEVIEW等序列分析软件。 可采用核酸序列分析法分析细菌 16SrDNA/16S-23SrDNA 区间序列、酵母18SrDNA/26S rDNA （D1/D2）序列及丝状真菌的18SrDNA/ITS1-5.8S-ITS2序列，提供科学的鉴定结果。 API细菌鉴定 API鉴定系统涵盖15个鉴定系列，约有1000种生化反应，已可鉴定超过600种的细菌。 鉴定过程中，可根据细菌所属类群选择适当的生理生化鉴定系列，通过软件将待测细菌与数 据库参比，得出鉴定结果。可应用API50C 系列、API20E系列、APIStaph系列对乳酸 杆菌 （Lactobacillussp.）和相关细菌、芽孢杆菌 （Bacillussp.）、葡萄球菌属 （Staphylococcus sp.）、微球菌属（Micrococcussp.）和库克菌属（Locuriasp.）进行鉴定。 技术分析 功能性分析及功能基因不断致力于工业微生物资源的功能及其功能基因研究，通过木聚 糖酶、纤维素酶、葡萄糖异构酶、β-甘露聚糖酶等功能基因的克隆进行菌种产酶的功能性 分析。应用gyrA、atpD及pheS等看家基因于微生物菌种鉴定，在某些种、亚种、株间有较 好的分辨效果。 RAPD、SSCP技术 随着微生物菌种应用的进一步发展，在食品安全管理、生物产品出口认证、知识产权保 护等行业需求日益增加，微生物菌种株水平的鉴别技术成为一个迫切需要解决的问题。采用 随机扩增多态性DNA （RandomlyamplifiedpolymorphismDNA，RAPD）技术和单链构象多 态性(SingleStrandConformationPolymorphism，SSCP）技术对微生物菌株进行鉴别。如采 用RAPD技术能够对同一菌种原始菌株与诱变菌株进行鉴别，对诱变菌株知识产权保护具 有重要意义；采用SSCP技术进行工业酒精酵母菌株的鉴别，此技术结合菌株发酵特性，在 酒类生产的质量控制方面起到积极作用。 TLC薄层层析 TLC薄层层分析技术应用于微生物菌种鉴定，进行细菌、放线菌细胞壁化学组分分析 （氨基酸、糖），作为划分属特征的重要鉴定技术手段，起到了良好的辅助作用。 全细胞脂肪酸分析鉴定系统 采用Sherlock全自动细菌鉴定系统，通过对不同菌株的脂肪酸图谱进行分析，并与标准 数据库进行比对，来鉴定细菌及酵母。该技术是细菌或酵母种水平鉴定的有效手段之一。（9） （G+C）mol%及DNA/DNA杂交通过采用DU800核酸蛋白分析仪测定Tm值，从而得到微 生物菌株的（G+C）mol%，并与模式菌株进行DNA/DNA 同源性分析，该鉴定技术手段是 多相鉴定的重要组成部分。