家蚕蛹体BmNPV病害垂直传播侵染模式探究.docVIP

家蚕蛹体BmNPV病害垂直传播侵染模式研究 　　摘要：应用BmNPV直接PCR诊断技术研究家蚕幼虫后期微量感染BmNPV后蛹体内BmNPV垂直传播侵染模式。结果表明：蛹体内BmNPV侵染模式为感染致死与感染非致死两种受害状态相混模式。感染致死受害状态具有典型病症表现，与幼虫感染模式相同，未构成BmNPV病害垂直传播途径。感染非致死受害状态无典型病症表现，蛹体外观与正常健康蛹体相同，能继续发育羽化成虫产卵，成为BmNPV病害垂直传播的隐疑途径，对蚕种安全构成潜在危害 关键词：家蚕；血液型脓病；核型多角体病毒（NPV）；蛹体；垂直传播途径 中图分类号：S884.5+1文献标识号：A文章编号：1001-4942（2016）09-0119-05 AbstractThe vertical transmission infection mode of BmNPV in Bombyx mori pupa after micro-infection of BmNPV at late larval stage was researched using direct PCR diagnostic technique. The results showed that the infection mode of BmNPV in pupa was the mixed mode of two damage states of lethal infection and non-lethal infection. The lethal infection damage state showed typical symptoms same as larvae infection mode， which did not form the vertical transmission channel of BmNPV disease. While the non-lethal infection damage state showed no typical symptoms. The pupa had normal appearance same as healthy pupa， which could continue to eclosion and oviposition. This channel was the doubtful vertical transmission channel of BmNPV disease， and it owned potential harm to the security of silkworm eggs. KeywordsBombyx mori； Nuclear polyhedrosis； Nuclear polyhedral virus； Pupa； Vertical transmission channel 家蚕是具有重要经济价值的鳞翅目昆虫，中国蚕丝业是最具特色的传统产业，蚕茧生丝产量已占世界总产量80%左右。家蚕血液型脓病是制约蚕桑生产的重大病害，占家蚕病害损失量七成以上，其病原是家蚕核型多角体病毒（BmNPV），它能够在家蚕幼虫期和蛹期发生危害，严重时成毁灭性流行危害。家蚕血液型脓病流行危害目前还没有理想的化学药物防治技术，只能实施养蚕环境消毒和淘汰典型病症蚕等技术措施来尽量减少病害损失[1] 依据家蚕组织病理学方法，只有在幼虫或蛹体的血液里观察到有BmNPV多角体存在时才能确诊为家蚕血液型脓病，目前尚未在家蚕成虫或卵内发现有BmNPV多角体。有研究认为BmNPV只存在环境污染食下侵染的水平传播侵染模式，不存在个体生殖的垂直传播侵染模式[2]，并将BmNPV基因序列分析结果、抗BmNPV遗传规律和控制环境污染食下侵染传播途径作为防控技术研发的依据[3，4]，在BmNPV早期诊断技术和抗BmNPV蚕品种选育上做了大量的防控家蚕血液型脓病实用技术研究[5，6]。针对家蚕血液型脓病是否存在通过个体生殖途径的垂直传播侵染模式，本研究应用了BmNPV直接PCR诊断技术，开展家蚕幼虫后期微量感染BmNPV后蛹体内BmNPV垂直传播侵染模式研究，证实家蚕幼虫后期微量感染对形成BmNPV病害垂直传播途径具有关键作用，为阻断BmNPV垂直传播途径、防控家蚕血液型脓病流行危害提供技术研发理论支持 1材料与方法 1.1攻毒液制备 取本实验室保存的BmNPV（AK株）多角体稀释液2.5×1010个/mL添食4龄起蚕，复壮增殖BmNPV多角体。于5龄起蚕后收集典型BmNPV病症蚕，剪去病蚕尾角采集血液样品。用CHCl3分解血液样品中的脂肪球等血细胞，无菌水反复差速离心去除杂质，获BmN