微波法提取芦荟黄酮和其含量测定探究.docVIP

微波法提取芦荟黄酮及其含量测定的研究 　　【摘要】：微波法以其操作简便、副产物少、产率高、产物易提纯等优点，已经被广泛应用于物质的提取和有机合成、酯化等反应.本文采用微波法，从新鲜芦荟中提取出黄酮类化合物，确定了微波提取的最佳工艺条件 【关键词】：芦荟；微波法；黄酮 1、实验部分 1.1试剂与仪器 仪器：CARY500UV-VWAS-NIR紫外-可见-近红外分光光度计（美国Varian公司）；电热恒温水浴锅（北京长源实验设备厂）；LG微波炉（天津乐津电子电器有限公司）；RE-52AA旋转蒸发器（上海振捷实验设备有限公司） 试剂：芦荟购自中国长春，品种为库拉索芦荟；芦丁对照品为中国药品生物制品检定所提供，w≥91.7%；实验所用试剂均为分析纯 1.2实验方法 1.2.1微波法提取芦荟中黄酮类化合物 称取30g鲜芦荟，加入150mL提取溶剂，进行微波提取，微波照射时间为30s，过滤，经活性炭脱色，浓缩，定容即为提取液 1.2.2标准曲线制备及样品分析 准确称取20mg芦丁标准品，用体积分数为60%的乙醇溶解，定容于10mL容量瓶中.准确吸取2.0mL标准溶液，用60%的乙醇定容于25mL容量瓶中，分别取稀释后的标准溶液0，1，2，3，4，5mL置于10mL容量瓶中，按照药典方法绘制标准曲线.黄酮类化合物质量浓度ρ与吸光度A的线性回归方程为A=0.0014+12.19542ρ，相关系数R2=0.99994，线性范围为0.160～0.081mg/mL 取一定量的芦荟提取液于10mL容量瓶中，按照绘制标准曲线的方法，置于比色皿中，在波长510nm处测定吸光度，由标准曲线方程计算得样品溶液质量浓度ρ，再计算出样品黄酮类化合物含量，计算公式为： 黄酮类化合物含量=ρ×V/W （1） 其中：ρ为质量浓度（单位为mg/mL）；V为体积（单位为mL）；W为样品质量（单位为g） 1.2.5回收率实验 准确称取10份鲜芦荟样品各30g，其中5份加入4mg芦丁标样，按照微波法最佳提取条件进行提取，用紫外-可见分光光度计测定吸光度值，计算黄酮类化合物的提取量，对加标和未加标的样品取平均值后，按（2）式计算回收率. 回收率=（加标样品的提取量-未加标样品的提取量）/加标量×100% （2） 2、结果与讨论 1微波法提取条件的选择 2.1.1料液比对黄酮类化合物提取量的影响 不同料液比的提取结果见表1.由表1可见，黄酮类化合物的提取量随着提取溶剂的增加而增加，在固定微波提取功率和提取时间的前提下，当提取溶剂体积大于原料质量的5倍时，黄酮类化合物的提取量基本保持不变，故选择料液比（g/mL）为1∶5.0 2.1.2提取级数对黄酮类化合物提取量的影响 固定微波功率和提取时间，对同一样品重复提取结果见表2.由表2可见，第1次的提取率达到77.61%，第2次为9.13%，第3次提取率只有3.26%，前2次提取的总提取率为86.74%，3次总提取率为90.00%，可见在前2次提取的基础上，再增加提取次数对黄酮类化合物的提取率增加不大，因此选择二级提取。每次提取的提取率计算公式为： 提取率=A0V0/（AV）×100% （3） 其中：A0为每次提取液的吸光度；V0为每次提取液的体积；A为3次总的提取液的吸光度；V为3次总的提取液的体积. 2.1.3微波功率对提取量的影响 以体积分数为95%的乙醇做溶剂，在提取时间为90s和料液比（g/mL）为1∶5.0的条件下，采用不同微波功率进行实验，所得结果见图1，由图1可以看出，微波功率在140～420W范围内，黄酮类化合物提取量随微波功率的增大增加不明显；当微波功率在420～560W时，微波功率再增大，黄酮类化合物提取量明显增加；当微波功率在560～700W时，黄酮类化合物的提取量下降.这可能是由于过高的微波功率对黄酮类化合物活性成分产生破坏，导致提取量下降.由于微波功率在560W时提取量最大，故选定560W作为微波提取功率 2.1.4提取时间对黄酮类化合物提取量的影响 用体积分数为95%的乙醇做溶剂，在微波功率为560W和料液比（g/mL）为1∶5.0的条件下，不同提取时间的提取量见图2.由图2可见，当提取时间为60s时，黄酮类化合物的提取量最大，低于60s，提取不完全，高于60s，部分黄酮类化合物可能被破坏，而导致提取量下降.在微波辐射过程中，电磁波把能量直接传递到原料内部，使之瞬时加热，当提取时间过长时产生过高温度，使黄酮类化合物活性成分降解或异构化，导致提取物有效成分含量降低.因此提取时间以60s为宜 2.1.5乙醇浓度对黄酮类化合物提取量的影响 在微波功率为5