氮素营养对榨菜组培苗影响探究.doc

氮素营养对榨菜组培苗影响研究 　　摘要：筛选了适合榨菜（Brassica juncea var.tumida Tsen et Lee）茎尖带下胚轴材料组织培养的生长调节剂，并对适合榨菜组织培养的不同氮素总量及不同氮素配比进行了研究。结果表明，生长调节剂配比 1.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA适合榨菜茎尖带下胚轴材料生长；氮素在KNO3用量为950 mg/L、NH4NO3用量为412.5 mg/L时，组培苗长势最优，正常苗数最多 关键词：榨菜（Brassica juncea var.tumida Tsen et Lee）；组织培养；氮素营养；生长 中图分类号：S637.9 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）16-4298-03 DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.16.058 榨菜（Brassica juncea var.tumida Tsen et Lee）是十字花科（Cruciferae）芸薹属（Brassica）芥菜种叶芥亚种大叶芥变种的变种，由野生芥菜（Brassica juncea）进化而来，是中国特产蔬菜，在蔬菜加工生产中占有重要的地位 芸薹属作物在离体培养有较多研究，研究者对大白菜、青花菜和甘蓝等作物的离体培养再生体系进行了较为深入的研究[1-5]。近年来，榨菜离体再生体系的研究也有了较大的进展，陈石头等[6]用浙桐1号带柄子叶获得了高频不定芽再生体系。沈进娟等[7]对涪陵3个地方品种榨菜做了详细研究，蔺市草腰子和郫县榨菜2个品种不定芽诱导较为容易，而永安小叶品种不定芽再生困难。氮素营养作为离体培养中使用量最大的元素，主要有硝态氮和铵态氮两种存在形式，两种存在形式及其浓度对外植体培养有重要的影响。榨菜离体培养主要以MS培养基为主，对MS培养基中氮素比对榨菜组织培养影响的研究较少 1 材料与方法 1.1 供试材料 供试材料为永安小叶榨菜种子，试验材料由渝东南农业科学院提供 1.2 试验方法 1.2.1 无菌苗的获得 挑选色泽饱满圆润的榨菜种子在流水下冲洗干净，转移到无菌操作机台用70%的乙醇浸泡30 s，无菌水冲洗2次，转入0.1%的升汞溶液中进行浸泡处理10 min，无菌水冲洗5次，接种在1/2 MS培养基上，不添加蔗糖、生长调节剂，琼脂浓度为5.5 g/L，pH 5.8，光照12 h/d，温度（25±2） ℃ 1.2.2 不同生长调节剂配比对榨菜离体培养的影响 以MS为基本培养基，配合使用6-BA（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mg/L），NAA（0.1、0.2、0.3 mg/L），蔗糖用量30 g/L，琼脂浓度为5.5 g/L，pH 5.8。每瓶接种6个带下胚轴茎尖，每个处理10瓶，光照12 h/d，温度（25±2） ℃。生长调节剂处理水平方案见表1，不添加生长调节剂作为对照组（CK） 1.2.3 氮素总量的变化对榨菜组培苗的影响 MS培养基中KNO3用量为1 900 mg/L，NH4NO3用量为1 650 mg/L，分别对KNO3和NH4NO3用量进行调整，各处理中硝酸钾用量调整为1 900、950 mg/L，硝酸铵用量调整为1 650.0、1 237.5、825.0，412.5 mg/L， 8个处理。培养基中均含有30 g/L蔗糖、5.5 g/L琼脂，生长调节剂水平由“1.2.2”条件中最佳生长调节剂比例配比，pH 5.8，光照12 h/d，温度（25±2） ℃，每个处理15瓶，每瓶接种6个带下胚轴茎尖 1.2.4 不同氮源比对榨菜组培苗的影响 MS培养基中氮素总量为60 mmol/L，在保证氮素总量不变的情况下，调整硝态氮与铵态氮比。将铵态氮与硝态氮比例调整如下：n（NH4+-N）：n（NO3--N）=（0∶60， 10∶50，20∶40，30∶30，40∶20，50∶10，60∶0），按上述顺序试验编号为Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7。其中，Y3中铵态氮与硝态氮比为MS培养基中的原始比，设定为对照组。试验中硝酸盐使用KNO3，铵盐在Y1、Y2、Y3、Y4中使用NH4NO3，Y5、Y6、Y7中使用（NH4）2SO4，生长调节剂配比及用量使用“1.2.2”条件中最佳生长调节剂配比，蔗糖30 g/L，琼脂5.5 g/L，pH 5.8，光照12 h/d，温度（25±2） ℃，每瓶接种带下胚轴茎尖6个，每个处理16瓶 2 结果与分析 2.1 不同生长调节剂配比对榨菜离体培养的影响 本试验采用的6-BA与NAA不同配比，研究不同生长调节剂配比对榨菜组培苗的影响。对照组在不添加任何生长调节剂的培养基上均先出根，后出芽。试验组全部先