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动物细胞工程 提问: 植物细胞工程常用的技术手段有哪些? 动物细胞的培养过程 有关概念 原代培养:用胰蛋白酶对剪碎的动物组织进行处理,分散后培养,即为原代细胞。(培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。) 传代培养:细胞培养过程中出现接触抑制,用胰蛋白酶使其从瓶壁上脱离下来,分散到多个培养瓶中继续培养,即为传代培养。 有关概念 思考讨论:在动物细胞培养过程中,为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理? 植物组织培养和动物细胞培养的比较 动物细胞融合 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 二、单克隆抗体 单克隆抗体 B淋巴细胞与抗体 如何大量生产单克隆抗体? 利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 过程: 病毒颗粒黏附细胞表面 病毒颗粒穿透细胞膜 细胞膜连接 细胞融合 5,意义: (1)突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能。 (2)制造单克隆抗体。 用途 诱导方法 细胞融合的方法 细胞融合原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 物理(离心、振荡、电刺激) 化学(聚乙二醇) 物理、化学方法(同左) 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 什么是抗体? 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 B淋巴细胞产生抗体。 通过细胞融合技术获得的杂交瘤细胞群产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点: 特异性强、灵敏度高 1.B淋巴细胞受抗原刺激后,可以产生抗体。 2.每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。 3.动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体,每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 * * 植物组织培养 植物体细胞杂交 动物细胞工程: 植物细胞工程: 1.动物细胞培养 3.动物细胞融合 4.单克隆抗体 5.胚胎移植 2.动物细胞核移植 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 一、动物细胞培养 1.发展历史: 20世纪初,人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的,还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年,美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织,把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周,并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题,而且开创了动物组织培养的先河。此后,在许多科学家的不懈努力下,动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。 2、动物细胞培养的应用和概念: 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 1、动物细胞培养液的主要成分: 葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子和动物血清等。 与植物培养基相比其特点是: (1)液体培养基 (2)含有动物血清 动物体细胞大都生活在液体的环境 幼龄动物 取动物器官 和组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 3、动物细胞培养过程: 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 加培养液 遗传物质未改变 遗传物质已改变 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 (分解弹性纤维) (剪碎) 细胞株:原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞存活到40~50代,这种传代细胞为细胞株。 细胞系:细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在培养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别: 细胞系的遗传物质改变,具有癌细胞的特点,失去接触抑制,容易传代培养。 胰蛋白酶处理动物组织,可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解,获得单个细胞。 3.动物细胞培养 的条件 1.无菌无毒的环境 2.营养 3.温度和pH 4.气体环境 思考: 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料? 1、动物细胞培养液的主要成分是什么?较植物组培培养基有何独特之处? 3、为什么培养前要将组织细胞分
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