国家自然科学基金研究方案撰写技巧 (2).ppt

案例分享 题目： 温肾健脾针法对脾肾两虚型肥胖肠道脂代谢核心菌群的调控机理 【摘 要】 肠道菌群不仅转化胆汁酸影响脂肪吸收，而且与体重及肥胖关系密切。中医将单纯性肥胖分为脾虚湿阻、脾肾两虚等型，针药均有肯定疗效，但缺乏诸如调节肠道菌群等微观机理研究。本课题拟纳入脾肾两虚型单纯性肥胖患者及健康志愿者各50例，比较其肠道菌群构成与脂代谢特征、大便胆酸盐谱及短链脂肪酸谱、大便能量与膳食纤维残存量、血液脂代谢关键激素(Leptin,insulin, Cholecystokinin)及FIAF酶含量，以期揭示脾肾两虚型肥胖证之能量收获及脂代谢核心菌群，及其导致机体脂质异常和肥胖的关联机制。以温肾健脾针法治疗至肥胖症状及BMI指标明显改善；采用前述方法检测疗效前30名每2周收集的血清与大便样本，获得温针法对肠道菌群及其脂代谢的动态调控模式。本项目可望揭示脾肾两虚型肥胖与肠道菌群之能量与脂代谢异常亢进的相关性，发现温肾健脾针法的全新治疗机理，拓展中医药肥胖治疗理论，并为多学科攻克肥胖作出奠基性贡献。 研究意义 肠道菌群与机体能量及脂质代谢关系密切，肥胖患者肠道含有促进能量收获与脂肪贮存的核心菌群。但不同证型肥胖患者是否有特定的核心菌群？脾肾两虚型肥胖相关核心菌群有何特征？针刺减肥作用机理之中，是否包括并如何调整肠道菌群？本课题拟完成这些十分重要的探索性研究。具体研究意义有三： （1）揭示脾肾两虚型肥胖证能量及脂代谢核心菌群，开启针刺减肥研究新领域； （2）建立温肾健脾针法经由调整肠道脂代谢相关的核心菌群而减肥的新学说； （3）构建针药减肥与肠道菌群研究新平台，促进肥胖机理研究与药物研发。 研究目标 揭示脾肾两虚型单纯性肥胖患者促进能量收获与脂代谢的肠道核心菌群，阐明温肾健脾针法通过调整脂代谢菌群而治疗肥胖的新机制，建立证候与肠道菌群研究平台。 2.1 研究内容 基于上述目标，本项目拟纳入脾肾两虚型单纯性肥胖患者及健康志愿者各50名，以及疗效评分前30名患者治疗中采集样本，完成下述研究： 2.2.1筛查促进脂肪代谢的肠道核心菌群。筛查对脂肪代谢起促进、抑制或双向作用的代表性菌属，然后采用自动菌种鉴定仪进一步鉴定到种。这三方面代表性细菌，组成与脂代谢直接相关的肠道核心菌群。 2.2.2分析胆汁酸谱、短链脂肪酸谱等大便脂代谢相关分子种类与含量。 2.2.3 检测单位大便卡路里残存率、膳食纤维含量。 2.2.4测试肥胖相关激素(leptin,insulin, Cholecystokinin)与FIAF酶含量。 2.2.5体外试验该核心菌群的能量收获效率。 2.2.6整合研究，揭示患者能量与脂代谢核心菌群特征，以及针刺减肥新机理。 2.3 拟解决的关键问题 宿主的生存环境、生活方式、遗传背景、生理病理状态、免疫功能、疾病史与用药史等多种因素，都可影响特定个体的肠道菌群。如何排除众多干扰因素，获得脾肾两虚型单纯性肥胖患者促进能量收获与脂肪代谢的肠道核心菌群，是本项目拟解决的关键问题。本项目拟采取下述四种方法，针对性地排除干扰因素，解决此关键问题 （1）严格病例纳入。采用中西医肥胖诊断权威标准，病证结合纳入病例。 （2）巧妙设计对照。 （3）强化检测指标的互补性、相互验证性。 （4）设计体外验证实验。 采用国内常用脾肾两虚型单纯性肥胖标准患者与健康对照各50例 验证研究：确认并优化研究结果 采用微量培养法检测上述肠道菌群能量收获与脂代谢效率 整合研究，获得如下成果： 1．脾肾两虚型单纯性肥胖负责能量和脂代谢的肠道核心菌群； 2．温肾健脾针法对该核心菌群的调控机理； 3．该核心菌群与患者脂代谢调控因子(激素、酶)的密切关系。 收集病证结合纳入的典型患者与对照组之血液与大便标本； 温肾健脾针法治疗3月；收集显效者前30名隔2周纳入的标本； 上述两类标本完成如下四方面的检测： 筛查能量收获与脂代谢之核心菌群：促进、抑制及双向作用代表菌株。 UPLC–MS法分析大便胆汁酸谱； GC–FID法分析大便短链脂肪酸谱。 Western法测定血清FIAF酶含量； ELISA法测定血浆Leptin等激素含量。 氧弹法测定单位大便残余能量； 酶-重量法测定膳食纤维残留量。  图2. 实验技术路线流程简图 3.2 研究方法和技术要点简述 3.2.1 典型脾肾两虚型肥胖证患者的纳入、治疗与疗效判断标准 为保障试验结果具有统计意义，同时考虑不超过20%的退出率，确定样本量为50例。由经过培训的中医与西医诊断学专家，纳入符合脾肾两虚型肥胖证患者，以及年龄、性别、生活状况等相匹配的健康对照。 3.2.1.2治疗方法 脾肾两虚型肥胖针灸治疗上，以温肾健脾为主。故多选用脾经