实验五+血液生化指标的测定.ppt

血液生化指标的测定 实验五 甘平 讲师2002 年毕业于上海医科大学，获硕士学位2002年-今，昆明医科大学2016年，毕业于云南大学生命科学学院，获博士学位2004-2005年，新加坡国立大学医学院访问学者2009-2010年，葛兰素史克中国上海研发中心访问学者联系方式：电话qq：1957178100；邮箱：ganping_yeow@ 一、实验目的(Experimental Objectives) 1.掌握GOD-PAP酶法测定血清葡萄糖的原理和方法； 2.掌握脲酶法测定血清尿素氮的原理和方法。 3.熟悉分光分析技术的原理、应用及其操作步骤。 4.了解血糖及血清尿素氮测定的临床意义。 实验一 GOD-PAP法测定血糖 （一）实验原理 葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢；在过氧化物酶（peroxidase，POD）的催化下，过氧化氢氧化4-氨基安替比林（4-aminoantipyrine ）和酚（phenol）缩合为红色醌类化合物 其最大吸收峰为505nm。红色醌类化合物的生成量在一定范围内与葡萄糖含量成正比，与同样处理的葡萄糖标准液进行比较，即可求得血糖含量。 葡萄糖氧化反应 （Trinder反应） 反应简式 葡萄糖 ＋ O2 ＋ H2O GOD 葡萄糖酸 ＋ H2O2 H2O2 ＋ 4-氨基安替比林＋酚 POD 醌亚胺 (红色) ＋ H2O 尿素在脲酶的作用下产生氨离子和二氧化碳，氨离子在碱性介质中与酚显色剂生成蓝色物质，其最大吸收峰为640nm。 蓝色化合物的吸光度值在一定范围内与反应体系中的尿素浓度成正比，与同样处理的尿素标准液作比较，可对血清中的尿素作定量分析。 实验二: 脲酶法测定血清尿素 反应式 CO(NH2)2 + H2O →2NH3+CO2 材料、主要仪器和试剂 （一）材料：血清 （二）仪器：722S型分光光度计、恒温水浴箱、涡旋混匀器 （三）试剂： 1. 葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法） 实验材料、主要仪器和试剂(Equipments , Materials and Reagents) 主要组成成分为： （1）R1：苯酚。 （2）R2：磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、4-氨基安替比林、POD、GOD、NaN3。 （3）标准液（5.55mmol/L）：1 × 1ml。 三、实验材料、主要仪器和试剂 3. 脲酶法测定血清尿素 （1）脲酶储备液及脲酶稀释液 （2）酚显色剂 （3）碱性次氯酸钠 （4）尿素标准液（10 mmol/L） 操作步骤(Operating Procedure) （一）血糖测定 1、待测样品：血清； 2、配制工作液: 等量混合R1与R2； 3、取三支试管，按下表操作： 血糖测定操作步骤 4. 各管混匀，置37℃水浴15分钟，于505nm波长处，以空白管调“零”点，测定各管吸光度（A）值。 （试剂盒线性范围：0~28mmol/L） 加入物 空白管(B) 标准管(S) 样品管(U)样本（μl） —— —— 15标准液（μl） —— 15 ——蒸馏水（μl） 15 —— —— 工作液（ml） 1.5 1.5 1.5 血清尿素测定操作步骤 1、待测样品：血清 2、取三支试管，按下表操作： 加入物（ml） 空白管(B) 标准管(S) 样品管(U)蒸馏水 0.02 —— —— 尿素标准液 —— 0.02 ——待测样本 —— —— 0.02酶缓冲液 0.25 0.25 0.25 充分混匀，37℃水浴 10分钟 酚显色