在黑色素瘤中异常表达的MHCII类受体.docx

在恶性黑色素瘤中MHC II类分子的异常表达吸引炎性肿瘤特异性CD4 + T-Cells并降低CD8+ T细胞的抗肿瘤反应Aberrant Expression of MHC Class II in Melanoma Attracts Inflammatory Tumor-Specific CD4+ T-Cells, Which Dampen CD8+ T-cell Antitumor Reactivity摘要在不存在局部炎症反应情况下，MHC类型Ⅱ分子表达主要限制在造血细胞和胸腺上皮细胞。然而，某些肿瘤，如黑色素瘤，可能获得MHC II类的异常组成性表达。在一组初级黑素瘤细胞群体的和相应地扩大了自体肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）中，我们将展示在具有高度MHC II类分子特异性及肿瘤有特异性T细胞应答的黑色素瘤细胞中，MHC II是如何表达的。值得注意的是，我们发现，肿瘤特异性CD4+ T细胞应答是由TNF产生支配。在IFNγ丰富的环境中，TNF降低CD8+ T细胞激活类似肿瘤部位的能力。相反，直接的CD4+ T细胞反应对无论是黑色素瘤细胞的增殖或活力无影响。总之，我们的结果表明了一种被MHC II类分子的异常表达激活的新免疫逃离机制的存在，这种机制靠吸引肿瘤特异性CD4 + T细胞引发肿瘤坏死因子主导的局部炎症反应转而去抑制CD8 +T细胞的反应。Cancer Res; 75(18); 3747–59.2015 AACR.引言在没有局部的炎症反应的情况下，MHC II型表达主要限于造血细胞和胸腺上皮。然而，某些类型的实体瘤，包括黑色素瘤亚单位，能从头组成表达MHC II类分子。另外，通过暴露于细胞因子例如IFNγ的方法，MHC II类可在几种细胞类型(包括肿瘤细胞)中被诱导表达。在黑色素瘤的MHC II类表达先前已发现与较短和较长的存活都相关联。的确，MHC II类表达可以使这些肿瘤被的肿瘤抗原特异性CD4 + T细胞直接检测。我们和其他人曾证明这种CD4+ T细胞能够产生Th1应答响应于自体肿瘤抗原。与此相反，最近的研究提出，分别表达在肿瘤细胞和肿瘤浸润免疫细胞的MHC II类分子与由淋巴细胞激活基因3（LAG3）的接合，可能会触发促存活信号和肿瘤细胞的抗细胞凋亡。此外，LAG3已被表征为免疫抑制性受体，并且其在T细胞上的接合可以在启动阶段而不是在效应阶段介导肿瘤微环境中的免疫反应的下调。为了阐明MHC II型表达与CD4+ T细胞应答和CD4+ T细胞的功能性模式在黑素瘤中的关联，我们进行了扩大的肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的一种多功能分析直接识别了一组的38自体配对的晚期患者产生的黑色素瘤细胞系。我们的研究结果揭示了一个新机制，MHC II表达的黑色素瘤对炎性CD4+ T细胞存在吸引，并且通过IFNg-介导及TNF诱导免疫反应局部扩大来反作用CD8+ T细胞应答，起到抑制作用。材料和方法病人和样品科学伦理委员会批准了在丹麦的首都地的所有的程序。根据赫尔辛基宣言在任何操作之前患者签署书面知情同意书。所有患者都被诊断为组织学确诊的晚期黑色素瘤，AJCCⅣ期（N?32）或IIIB（N= 1，完全切除），IIIC（N?5，其中两种是完全切除）。从ESTDAB得到（http://www.ebi.ac.uk/ipd/estdab/）原发黑素瘤的WM-115，FM-55-P，FM-55-M1，和FM-55-M2的肿瘤细胞系。 WM-115，WM-75，WM-793，和WM-266-4已被描述过特征。用于流式细胞术的抗体用流式细胞仪抗体小组分别为：- CD4 +和CD8 + T细胞应答的多方面特性：CD4 QDOT 705（Life Technologies公司），CD8 QDOT605（Life Technologies公司），近红外活/死可固定死细胞染色即（Life Technologies公司），MIP-1A FITC（eBioscience公司），MIP-1B PerCP-eFluor 710（eBioscience公司），CD107a Brilliant Violet 421，IFNG PE-Cy7，TNF-APC，IL2 Brilliant Violet 650（Biolegend公司），IL17A Brilliant Violet 510。- 所有其他肿瘤的T细胞共培养实验：CD4 FITC，CD8PerCP，可固定活力染料eFluor 450（eBioscience公司），IFN PE Cy7，TNF-APC，CD107a PE。- MHC I类特性：抗HLA-ABC的APC，7-AAD- MHC II类特性：抗HLA-DP，DR，DQ FITC，7-AADTIL和黑色素瘤细胞系的制备本研究使用的TIL是按照在其他研究中广泛