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* * * * * EHEC O104:H4毒力基因检测 wzy-1 agttcattagatcgaggtt 450bp wzy-2 ctccttgcaaatgtgcaa O104检测PCR引物 EHEC O104:H4毒力基因检测 H4检测PCR引物 H4特异引物： fliC-5 (5-TGA GTG ACC AGA CGA TAA CAG GG-3) fliC-6 (5-GGA CGA TTA GTG GGT GAA ATG AGG-3) PCR产物大小1243bp. EHEC O104:H4毒力基因检测（杜邦试剂盒） 荧光定量PCR反应体系： 将Forward Primer和Reverse Primer混合后用试剂盒提供的PCR buffer稀释至终浓度0.1-0.5uM，取25ul 取PCR buffer裂解后的增菌液25uL 总反应体系50uL，直接加入带有PCR药片的反应管中。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * Jason Wang Technical Account Manager, Qualicon China EHEC O104:H4 肠杆菌科(Enterobacteriaceae) 一大群居住在人和动物肠道中 生物学性状近似的革兰阴性短小杆菌 广布于自然界 多数是肠道的正常菌群，但当宿主免疫力降低或细菌移位至 肠道外部位时可成为条件致病菌 至少有30个菌属，120个以上的菌种 少数为致病菌，是肠道传染病的最重要病原菌 肠杆菌科中与医学有关的常见菌属 埃希菌属 大肠杆菌 志贺菌属 痢疾志贺菌 爱德华菌属 迟钝爱德华菌 沙门菌属 伤寒沙门菌 枸橼酸菌属 弗氏枸橼酸杆菌 克雷伯菌属 肺炎克雷伯菌 肠杆菌属 产气肠杆菌 哈夫尼亚菌属 蜂窝哈夫尼亚菌 沙雷菌属 粘质沙雷菌 变形杆菌属 普通变形杆菌 摩根菌属 摩氏摩根菌 普罗威登斯菌属 雷氏普罗威登斯菌 耶尔森菌属 鼠疫耶尔森菌 欧文菌属 草原居民欧文菌 菌属 代表种 H抗原 (鞭毛) O抗原 (LPS侧链) K抗原或Vi (荚膜) F抗原 (菌毛) 复杂的抗原构造? 肠杆菌科的细菌引起不同部位感染 中枢神经系统（埃希菌属） 下呼吸道（克雷伯菌属、肠杆菌属、埃希菌属 ） 血液（埃希菌属 、克雷伯菌属、肠杆菌属） 胃肠道（埃希菌属 、沙门菌属、志贺菌属、耶尔森菌属） 泌尿道（埃希菌属 、变形杆菌属、克雷伯菌属、摩根菌属） 埃希氏菌属 Escherichia §是人类和动物肠道中的正常菌群 §出生后数小时就进入肠道，并终生伴随 §以大肠埃希菌（E.coli）最为重要，是最常见的临床分离株 大肠埃希菌 正常菌群，一般不致病 条件致病 某些带有致病基因的血清型，引起肠道感染 细菌居住部位改变引起的肠外感染： 尿路感染最常见 致病菌株 大肠埃希菌 分类 可引起腹泻的大肠杆菌称为肠道致病性大肠杆菌或致泻性大肠杆菌。目前根据毒力因子、致病机理和流行病学特征，通常将致泻性大肠杆菌分为5 类： 肠产毒性大肠杆菌（ETEC） 肠侵袭性大肠杆菌（EIEC） 肠致病性大肠杆菌（EPEC） 肠黏附性大肠杆菌（EAEC） 肠出血性大肠杆菌（EHEC） 致泻性大肠杆菌引起的腹泻 肠致病性大肠杆菌 （Enteropathogenic Escherichia coli, EPEC） 代表菌株：E2348/69，血清型O127:H6 测序菌株：E2348/69 EPEC是流行病学研究中最早发现的引起腹泻的大肠杆菌，不产生肠毒素及其他外毒素，无侵袭力。病原菌在十二指肠、空肠和回肠上段粘膜表面大量繁殖，粘附于微绒毛，导致刷状缘被破坏、微绒毛萎缩、上皮细胞排列紊乱和功能受损，造成严重腹泻。EPEC对细胞的粘附有两种类型。局限性粘附是指病原菌呈块状粘附在肠粘膜细胞表面的某一部分，弥散性粘附是病原菌主要以单个分散粘附在细胞表面。由于两者在生物学特性、致病性等方面存在较大差异，有学者称弥散粘附的EPEC为EPEC ∥型或者弥散粘附性大肠杆