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流式细胞术免疫标记应用简介 2009-12-03 上次流式细胞术讲座内容（概述） 免疫标记技术 免疫标记技术（immunolabelling technique）:是指用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂或电子致密物质等作为示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。 流式细胞术检测蛋白质分子：免疫荧光标记技术 流式细胞术免疫荧光标记的应用 检测细胞表面蛋白抗原 检测细胞胞浆内蛋白性抗原 检测细胞内细胞因子 优势：在同一细胞上同时检测多种标志 血液系统各型细胞免疫标志 CD34+抗原在早期造血祖细胞内呈高水平表达，随着细胞成熟其表达呈进化性下降，继而消失。 CD38抗原是造血干细胞向多系定向分化的标志之一，并随一定的分化过程表达上调 最近发现CD90（Thy-1）是比CD34更早的干、祖细胞标志 结合多种分化抗原的表达可以作为造血细胞不同发育阶段的标志。 如CD34+、CD33+细胞群为多能干细胞向髓系定向的标志； CD34+、CD19+多为多能干细胞向B系定向的祖细胞。 CD34+、TdT+、CD10+、CD7+则被认为是向T系定向的祖细胞。 ??? T细胞及其亚群 T祖细胞（pro-T）的表型为CD34+、TdT+、CD10+、CD7+ 未成熟T细胞标志CD3、CD4和CD8。 在T细胞发育过程中，CD7是最早出现的T细胞标志，且贯穿表达在整个T细胞分化发育过程中。 胸腺细胞要分化发育为有功能的成熟T细胞，细胞表面标志需经历一定的变化过程。 进入外周淋巴器官和血液，执行免疫功能 CD3+、CD4+、CD8-：T辅助/诱导细胞（Th/Ti），占T细胞总数的60%~70%； CD3+、CD4-、CD8+：T抑制/杀伤细胞（Ts/Tc） ， 20%~30%； CD3+ CD4+ CD8+ ： 1%~3%； CD3+ CD4- CD8-：1%~10%。 前三种表型细胞的TCR主要为TCRαβ，而CD4- CD8- T细胞主要表达TCRγδ，他们都执行细胞免疫功能。 CD2是绵羊红细胞受体和淋巴细胞功能相关抗原-2（LFA-2），表达于人95%T细胞、50%～70％胸腺细胞和大颗粒淋巴细胞（LGL／NK）的表面。 CD3是T细胞表面抗原，表达于成熟胸腺细胞、静息和激活的的外周血T细胞，是鉴定T细胞的重要标志，其胞浆和膜CD3是早期和普通型T细胞白血病的主要分型标记。 CD5、CD7是T细胞白血病较特异的标记，也是髓系白血病时最常见的伴随标记。CD45则是白细胞的共同标记抗体 CD25和CD28主要分布于活化T淋巴细胞表面，为活化T淋巴细胞标志。胸腺细胞、静止T细胞、静止B细胞以及NK细胞表面无表达。 末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）和II类人类白细胞抗原（HLA-DR）的阳性表达对早期T细胞白血病的诊断有重要价值。 80％～90％和95％以上的NK细胞表达CD16和CD56。用CD3-CD16+CD56+可定义NK细胞。 B细胞标记 B细胞 B细胞的分化主要分为B祖细胞、前B细胞、未成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞和浆细胞6个阶段。 （1）B祖细胞（pro-B）：此期最早表达的B细胞特异性抗原是CD19，同时表达CD34、细胞核TdT、HLA-DR、CD40、CyCD22。 （2）前B细胞（pre-B）：CD34和TdT消失，出现CyCD79、CD10、CD20、CD9、CDw78、CD74，cμ+（胞浆IgM重链）。 （3）未成熟（早期）B细胞（immature B cell）：CD9、CD10消失，出现 SIgM、CD22。CD20、CD24、CD40、CD72、CD74、CDw78、CD79表达增加。其他新的B抗原CD37、CD2、CDw75、CDw76相继出现。 （4）成熟B细胞（mature B cell）：SIgM和IgD同时表达，并出现CR、FcR和丝裂原受体，上述B细胞抗原继续存在。 （5）活化B细胞（activated B cell）：成熟B细胞被抗原或丝裂原刺激后，成为活化B细胞，继之增生和分化。在此过程伴随表达B细胞激活抗原CD23、CD77、CD80、CD86和其他激活相关抗原如CD25、CD26、CD30、CD69、CD70、CD71、CD38等。膜结合型Ig逐渐减少，分泌型Ig逐渐增加。 （6）浆细胞（plasma cell）：激活B细胞进一步分化成为产生抗体的浆细胞，这时获得PC-1、PCA-1和CD138浆细胞特异抗原，CD85表达增加，CD38抗原再出现。而SIg和上述B抗原消失。CD79仍可存在于胞质中。 B细胞上的CD抗原分为： ①B细胞限制性（特异性）抗原： CD19、CD20、CD21、 CD22、