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液相色谱故障判断分析 主讲人：李效宽 时间：2010年11月 能引起HPLC发生问题的潜在因素: 工作环境 电源及地线 流动相 泵 进样器 保护柱 在线过滤器 连接管路 色谱柱 检测器 数据处理装置 操作 基线问题分析 基线噪声 基线噪声 流动相内含有空气 - 脱气处理 检测池内有气泡 - 冲洗检测池 色谱柱内有未洗脱尽的组份 - 洗脱色谱柱. 系统有漏液之处 - 检漏并处理 电噪声 - 去除噪声源, 信号线屏蔽, 检查系统接地状况 检测器光源灯能量低 - 更换光源灯 检测池污染 - 冲洗检测池 基线噪声 基线周期性噪声 绝大多数情况下是来源于泵的问题 泵头内有气泡 - 流动相脱气 ,泵头排气(注意正确的排气方法) 泵进出口阀有问题 - 更换阀组件 柱塞杆有问题 - 更换柱塞杆及其密封圈 溶剂混合不良 - 加装混合器 电噪声 - 去除噪声源 基线噪声 非周期性噪声 气泡 - 流动相脱气 检测池内有气泡 - 流动相脱气, 检测池后加适当反压 系统有漏液之处 - 检漏并处理 溶剂混合不良 - 加装混合器 电噪声 - 去除噪声源 基线漂移 系统未充分平衡 梯度系统 - 溶剂A于溶剂B的ABS值相差大 - 试用另种溶剂或使用基线扣除法 色谱柱有其他组份被洗脱出 - 冲洗, 直至基线稳定 溶剂发生变化 (如溶入气体或溶剂挥发) - 氦气或脱气机脱气, 溶剂瓶避光,密封(但要 注意防止溶剂瓶内产生负压) 系统有漏液之处 - 检漏并处理 环境温度影响 (尤其对示差,电导,电化学检测) - 室温,柱温,检测池温度控制 反压变化 - 溶剂和样品过滤. 注意黏度过大的样品 基线周期性波动 温度影响 - 环境温度及检测池温度控制. 注意空调机的影响 溶剂混合不良 - 加装混合器 流动相脱气不良 - 流动相脱气 供电电源的影响 泵不良 - 检修处理 基线有无规律的尖峰 气泡 - 溶剂脱气 电路接触不良 - 保证清洁, 接线牢固, 接点无氧化 光源灯不良- 检查处理 电噪声 - 去除噪声源 脱气方法 脱气方法 在线脱气机脱气 氦气脱气 真空过滤脱气 注意: 溶剂应每天脱气 无样品峰 负峰 系统性能 HPLC 系统组件　　 * 泵 * 进样器/自动进样器 * 色谱柱 * 检测器 * 数据系统 所有组件均会发生问题，都需要进行故障排除！ HPLC色谱柱故障症状 A. 色谱柱柱压 B. 色谱峰峰形 色谱柱柱压 色谱柱柱压 色谱柱柱压 色谱柱柱压 预防柱压过高 采取色谱柱保护措施 样品制备 适当适时冲洗色谱柱 含缓冲盐的流动相一定要过滤 保持更换缓冲液和水 色谱峰峰形 色谱峰峰形　 裂分峰 * 色谱柱污染 复杂样品基体或待测样品量大 * 颗粒物堵塞陶瓷片 复杂样品基体或待测样品量大 * 色谱柱死体积 流动相pH7时，硅胶溶解(除非使用特殊色谱柱) * 样品溶剂效应 样品溶剂强于流动相-裂分峰和扩展峰取决于样品量 色谱峰峰形 色谱峰峰形 色谱峰峰形 色谱峰峰形 色谱峰峰形 色谱峰峰形 色谱峰峰形 色谱峰峰形 色谱峰峰形 色谱峰峰形 色谱峰峰形 色谱峰峰形 保留时间 保留时间 保留时间 保留时间 保留时间 保留时间 结 束 谢谢大家！ 峰拖尾-柱外体积 0.12mm内径管线用于毛细管HPLC中2.1内径色谱柱 0.17mm内径管线用于分析型HPLC中2.1~4.6内径色谱柱 0.25mm内径管线用于半制备型HPLC中9.4内径色谱柱 0. 5mm内径管线用于制备型HPLC中21.2内径色谱柱 50 mL 柱外体积（管线） 4 3 2 1 Time (min) 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 10 mL 柱外体积 Time (min) 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 4 3 2 1 样品: 1. 苯丙胺酸 2. 5-苯基-3, 6-二氧-2-哌嗪乙酸 3. Asp-Phe 4. 天冬甜素 色谱柱: StableBond SB-C18, 4.6 x 30 mm, 3.5 mm 流动相: 85% H2O with 0.1% 三氟乙酸 : 15% ACN 流速: 1.0 mL/min 温度: 35°C 保