生物选修一大肠杆菌的培养和分离.ppt

1-1什么是生物技术 生物技术=生物工程 应用自然科学及工程学原理，以微生物体、动物体、植物体或其组成部分作为生物反应器将物料进行加工，以提供产品来为社会服务的技术。 1-2 传统生物技术 传统生物技术指主要通过微生物的发酵来生产商品.如:酱、醋、酒、面包、奶酪、酸奶等 1-3 现代生物技术 一般而言，現代生物技术可以分成以下五种： 一、细胞工程 二、发酵工程 三、蛋白质工程 四、酶工程 五、基因工程 一、细胞工程 按照人们的需要和科学设计改变细胞的遗传基础，并通过细胞(组织)培养，细胞杂交(融合)，核移植和胚胎移植等技术，重组细胞的结构和内含物，以改变生物的结构和功能，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。 二、发酵工程 微生物的无氧呼吸叫发酵 1.定义：利用DNA重组技术对不同生物的遗传基因，根据人们的意愿，进行基因的切割、拼接及重新组合，再转入生物体內，产生出人们所期望的产物或创造出具有新的遗传特征的生物类型。 三、蛋白质工程 蛋白质工程主要包括了解合成蛋白质的DNA编码序列、蛋白质的分离纯化、蛋白质的序列分析和结构功能分析、蛋白质结晶和结构力学分析等。 四、酶工程 酶工程即利用基因工程等手段，改变酶或蛋白质的折叠方式、空间结构、催化活性和稳定性等 选修1需学习的实验 （微生物的利用） 实验1 大肠杆菌的培养和分离 （酶的应用） 实验4 果汁中的果胶和果胶酶 实验5 加酶洗衣粉的使用条件和效果 实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 （生物工程在食品加工中的应用） 实验8 果酒及果醋的制作实验 实验10 泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定 （浅尝现代生物工程） 实验11 植物的组织培养 一、基础知识 一基础知识 细菌的外形与大小 细菌：单细胞不分枝的原核微生物。 细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染色（革兰氏染色）后显微镜观察 革兰氏染色 革兰氏染色是一种用于细菌的染色法。 革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌 细菌的构造 细菌细胞由外向里依次有鞭毛、菌（纤）毛、荚膜、细胞壁、细胞膜、细胞质、 拟核，细胞质中又有液泡、储存性颗粒、核质等。 *细胞壁 成分：肽聚糖 细胞壁有哪些功能？ ①固定细胞外形； 菌落： 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 细菌的营养物质 碳源 有机 、无机 氮源 有机 、无机 水 无机盐 生长因子 即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶 大肠杆菌的培养与分离 1．液体基础培养基 牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g ，蒸馏水100ml，加热溶解以上成分，冷至40-50℃，调pH值至7.4~7.6，煮沸3-5分钟，补足水分，过滤、分装、高压灭菌。 2．半固体基础培养基 在液体基础培养基100ml中加琼脂0.2-0.5g，加热至100℃使琼脂熔化，分装试管，高压灭菌。取出后直立放置至琼脂凝固。 3．固体基础培养基 在液体基础培养基100ml中加琼脂2-3g，加热至100℃使琼脂化，分装于试管和三角烧瓶中，高压灭菌。取出后趁热将试管倾斜一定角度放置，琼脂凝固后即成普通琼脂斜面；将三角烧瓶中培养基倾注于灭菌平皿内，凝固后即成琼脂平板基础培养基。 选择培养基 鉴别培养基 从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作 （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 补充：表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯 细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。 无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。 细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌 标本的采集 无菌试管、烧瓶的使用 4.接种前准备 用肥皂洗手并使用酒精消毒。 点燃酒精灯 →酒精棉擦拭双手 →酒精棉擦拭桌面 倒平板 接种、划线 灼烧接种环 →取菌液 →划线分离 接种、划线 灼烧接种环 →取菌液 →划线分离 接种、划线 为什么通过划线分离可得到单菌落？ 每划完一个区域要不要灼烧接种环？ 半固体培养基： 无动力 有动力(弥散) 观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定 按物理状态来分 加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: