第六节细胞裂解酶.ppt

Page ? * 第六节 细胞裂解酶 一 溶 酶 菌 二 蛋 白 酶 K 三 纤维素酶 1、溶菌酶的作用：裂解细胞的细胞壁 2、种类：细菌细胞壁溶菌酶，真菌细胞壁 溶菌酶。 一 溶酶菌 3、溶菌酶是一种碱性球蛋白，分子中碱性氨基酸、酰胺残基和芳香族氨，酸的比例较高，酶的活动中心是天冬氨酸和谷氨酸。 基因工程常用鸡蛋清溶菌酶。鸡蛋清溶菌酶是碱性球蛋白，具有4个S-S键。 Da 全称道尔顿，是分子量最常用的单位，就是将分子中所有原子按个输求原子量的代数和。由于蛋白质是大分子，所以常用KDa。 其水解位点是N-乙酰胞壁酸（NAM）的 1位碳原子和N-乙酰葡萄糖胺（NAG） 的4位碳原子间的?-1,4-糖苷键。 主要作用：裂解 细菌菌体。裂解微生物 细胞壁 溶酶菌作溶酶菌性质稳定，对热的稳定性强，所以溶酶菌裂解细菌往往 PH6.0~7.0和25℃。 溶菌酶是母乳中能保护婴儿免遭病 毒感染的一种有效成分，它能通过 消化道而保持其活性状态，溶菌酶还 可以使婴儿肠道中大肠杆菌减少，促 进双歧杆菌的增加，还可以促进蛋白 质的消化吸收。 二 蛋白酶K 蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋 白酶，用于生物样品中蛋白质的一般降解。 从林伯氏白色念球菌，尤其适合水解羧基 末端至芳香族氨基酸和中性氨基酸之间的 肽键。 *值得注意的是，蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果. 蛋白酶K的作用温度和时间一般是37℃水 浴和2~5h。最适PH为7.5~12，对热稳定。 三 纤维素酶 纤维素酶是指能水解纤维素?-1,4-葡萄糖 苷键，使纤维素变成纤维二糖和葡萄糖 的一组酶的总称。 是由葡聚糖内切酶（Cx酶），葡聚糖 外切酶（C1酶）， ?-葡萄糖苷酶 （CB酶）三个主要成分组成的 诱导型复合酶系。 纤维素酶是一种重要的酶产品，是一种复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶活力。由于纤维素酶在饲料、酒精、纺织和食品等领域具有巨大的市场潜力，已被国内外业内人士看好，将是继糖化酶、淀粉酶和蛋白酶之后的第四大工业酶种，甚至中国有可能成为第一大酶种，纤维素酶是酶制剂工业中的一个新的增长点。 纤维素酶来源广泛，常采用微生物发酵法获得。 在基因工程操作中，纤维素酶主要用于制备植物原生质体。在25~30℃和4.8~5.8条件下，纤维素酶和果胶酶一起降解细胞壁，释放出原生质体。 Page ? * * *