微生物限度检查方法适用性试验方案.doc

微生物限度检查方法适用性试验报告 品名：黄连上清片 批号******药业有限责任公司 1.概述 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括需氧菌总数、霉菌数和酵母菌总数及控制菌检查。当建立产品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌、霉菌和酵母菌数的测定和控制菌检查。 我公司生产的品种黄连上清片由于依照《中国药典》2010版的检查方法验证，细菌、霉菌和酵母菌、控制菌检查均采用平皿法。故现升级为《中国药典》2015版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌拟采用平皿法重新进行方法适用性试验，以确认平皿法仍然适用于该品种的微生物限度检查。 2.验证内容 2.1培养基确认 品名 批号 用途 培养基适用性检查时间 胰酪大豆胨琼脂培养基 检测需氧菌 沙氏葡萄糖琼脂培养基 检测霉菌及酵母菌 肠道增菌液体培养基 检测耐胆盐革兰阴性菌 紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基 检测耐胆盐革兰阴性菌 胰酪大豆胨液体培养基 检测需氧菌、耐胆盐革兰阴性菌、沙门菌、大肠埃希菌 麦康凯琼脂培养基 检测大肠埃希菌 麦康凯液体培养基 检测大肠埃希菌 RV沙门增菌液体培养基 检测沙门菌 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基 检测沙门菌 经检查，上述培养基来源于北京奥博星科技有限公司，是我公司审计的合格供应商，并经过培养基适用性实验检查合格，可以使用。 确认人： 确认日期： 2.2检查用培养基配制方法 培养基名称 配制方法 PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 取本品14.63g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 胰酪大豆胨琼脂培养基 取本品40g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 培养基名称 配制方法 沙氏葡萄糖琼脂培养基 取本品64.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 胰酪大豆胨液体培养基 取本品29.8g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 沙氏葡萄糖液体培养基 取本品30.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 麦康凯琼脂培养基 取本品54.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 麦康凯液体培养基 取本品35.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 RV沙门增菌液体培养基 取本品27.5g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基 取本品55g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 上述培养基按照规定的方法配制、灭菌后可以使用。 确认人： 确认日期： 2.3使用设备 名称 型号 校准单位 有效期至 恒温培养箱 恒温培养箱 生化培养箱 上述设备经过校准合格，设备状态良好，可以使用。 确认人: 确认日期： 2.4实验用菌株 实验菌株 用途 传代编号 形态检查 金黄色葡萄球菌 需氧菌总数计数 特征明显，无变异 铜绿假单胞菌 需氧菌总数计数 特征明显，无变异 枯草芽孢杆菌 需氧菌总数计数 特征明显，无变异 白色念珠菌 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数 特征明显，无变异 黑曲霉菌 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数 特征明显，无变异 大肠埃希菌 大肠埃希菌、耐胆盐革兰阴性菌检查 特征明显，无变异 铜绿假单胞菌 耐胆盐革兰阴性菌检查 特征明显，无变异 沙门菌 沙门菌检查 特征明显，无变异 上述传代后待使用的菌种在5代之内，菌种特征明显，无变异，可以使用。 确认人： 确认日期： 2.5试验方法 2.5.1供试品制备 取供试品 10g加PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液，该供试液可以用于需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌的检查。 2.5.2菌液的制备 2.5.2.1取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨琼脂斜面培养物一铂金饵，加入胰酪大豆胨液体培养基中置30～35℃培养箱中培养18～24h，取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养物1ml加入PH7.