经典液相色谱法.ppt

d 两色斑中心间的距离。 W1、W2两色斑的峰宽(扫描测定)。一般亦可用纵向直径。 2. 分离参数 分离度(resolution; R ) 例：在薄层板上分离A、B两组分的混合物，当原点至溶剂前沿距离为16.0 cm 时，两斑点质量重心至原点的距离分别为6.9 cm 和5.6 cm，斑点直径分别为0.83 cm 和0.57 cm。 求两组分的分离度及Rf 值。 解： 四. 薄层色谱法 点样 展开 过程：铺板→活化→点样→饱和→展开→显色→定性定量 1. 原理: 将混合组分的试液, 点在铺了吸附剂的玻璃板一端, 在密闭容器中用适当的溶剂 (展开剂、流动相) 展开, 各组分不断地被吸附, 解吸附… 随展开剂前移, 利用吸附剂对不同组分的吸附力 (吸附常数)不同, 产生差速迁移, 而达到分离。 TLC 特点： 快速；灵敏(几～几十微克)；高选择；显色方便。 2. 固定相 (stationary phase) 吸附柱色谱的固定相薄层色谱也可以使用, 但薄层色谱所用的硅胶、Al2O3粒度比柱色谱更细。 硅胶 40 ?m (一般要求200目左右) 符号: 硅胶G 硅胶 + 煅石膏 硅胶H 硅胶(未加任何物质) 硅胶HF254 硅胶不含粘合剂+荧光物质 硅胶GF254 硅胶+煅石膏+荧光物质 吸附剂(硅胶), 粘合剂(煅石膏), 掺入荧光剂254 nm, 呈黄绿色。 薄层板的铺制 常用平滑的玻璃板，洗净待用。 软板: 吸附剂直接铺涂。最大缺点，风吹即飞(已不用)。 硬板: 吸附剂+粘合剂?糊状?铺板?凉干?活化 常用粘合剂: CMC-Na 羧甲基纤维素钠。(?0.25～0.75%的 CMC-Na水溶液与吸附剂3:1调粘研磨…) 活化: 凉干的板在110℃活化1小时，于干燥器中备用。 3. 展开剂选择: (同柱)仅操作方法不同。 分离强极性物质, 选择强极性展开剂, 同时也应考虑固定相的活性。 分离混合样品时, 展开剂选择一般规则: (1)先用单一的中等极性展开剂试一下。 (2)改用二元展开剂, 其比例要摸索。 目的: 改变展开剂的极性。 展开剂 Rf（A） Rf（B） 分离效果 苯 0.45 0.42 分不开 苯+甲醇 0.38 0.52 分开 例：A，B两组分的试样 问：A、B哪个组分的极性大 答：B的极性大。展开剂极性增大，极性大的Rf 值增大。 一般做实验组分Rf控制在0.2～0.8之间。 4. 点样与展开: 4.1. 点样 点样量一般在1～几十?g, ? 2～3 mm。 点样量太大, 斑易拖尾, 影响分离效果。 注: 有时用于薄层制备与分离提取时,条状点样。 点样位置: 距底边1.5～2cm处, 铅笔画线、点点。 4.2 展开 先饱和15～20min，防止边缘效应 展开剂浸薄层板下端0.5cm，不能浸住起始线 层析缸应密闭 展开方式：单向展开，双向展开…… 5. 定性和定量分析 5.1 定位 本身有色 -显色剂 紫外灯下显色 日光下显色 碘 硫酸 茚三酮等 荧光薄层板 +荧光物质 紫外吸收物质 定 位 - 荧光薄层板 常用硅胶GF254板 5.2 定性分析：比较组分与对照品 Rf值 对未知样品，要几个展开体系均有一致Rf 值，或双向展开法确认。 5.3 定量分析 洗脱法 薄层扫描 目视比色 比较色斑大小、深浅。 误差±10％ 刮下 溶解 光度法测定 误差±5% 误差5% 五. 纸色谱法 1. 基本原理 液—液分配色谱 载体 滤纸的纸纤维 固定相 滤纸上吸附的水 流动相 与水不相混溶的有机溶剂 操作类似于薄层色谱法，但原理不同 定性参数 Rf 2. 实验条件选择: (1) 选纸: 质地均匀, 无折痕。 若Rf小, 选中速或快速滤纸; 若粘度大,选质地松的滤纸。若 组分多,选中速或慢速滤纸。一般常选中速滤纸。 (2) 点样: 一般几～几十 ?g, ? 2～3 mm (3) 展开: 先饱和, 再展开。 (4)定性: Rf 显色：与薄层一样 (5)定量: 剪下,洗脱,光度法定量。 Rf 物质极性 极性大，Rf小 极性小，Rf大 展开剂极性 展开剂极性↑ 极性物质Rf ↑ 亲脂性组分Rf ↓ 展开剂蒸气 对Rf 影响较大，应先让溶剂蒸气将层析缸饱和 温度