脐带间充质干细胞对CIA大鼠炎症因子的干预.ppt

声明;;实验;脐带间充质干细胞对CIA大鼠炎症因子的干预;引言 ;脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells，Uc-MSC)表达多种胚胎干细胞的特有分 子标志，具有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性 低、取材方便、不受道德伦理限制等特征受到临床 关注。课题以CIA大鼠为观察对象，探讨RA炎症黏 附因子水平变化及Uc-MSC对其的干预作用。 ;材料和方法;主要试剂;实验方法; CIA大鼠模型建立：雌性近交系SD大鼠，随机分为正常组(见 图1a)、模型组(见图1b)、Uc-MSC组，每组10只。制备0.01 mol/L乙酸溶液中溶解的鸡源性Ⅱ型胶原 (质量浓度为5 g/L)， 充分溶解后与完全弗氏佐剂(CFA)等体积混合，并充分乳化成 Ⅱ型胶原乳剂。予20只大鼠右后足跖皮内注以0.1 mL免疫大 鼠，第21天时再次以每只0.1 mL的剂量同部位皮内多点激发 注射免疫大鼠，建立Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎大鼠模型。 各组大鼠处理：取Uc-MSC 2×109L-1，于造模后第4周Uc- MSC组经大鼠尾静脉注射，模型组注射生理盐水0.5 mL。 ;;Uc-MSC表型鉴定： 采用流式细胞术对CD14、CD34、 CD44、CD45、CD73、CD90、CD105及HLA-DR表面标记 进行表型分析， 其中CD44、CD73、CD90和CD105阳性， 阳性率95%；CD14、CD34、CD45和HLA-DR阴性，阳性 率2%，确认为Uc-MSC细胞。 指标检测：模型组和Uc-MSC组分别于第7天及第35天每组 各取5只大鼠麻醉，于腹主静脉取血5 mL，分别置肝素抗凝 管和血清管中，检测中性粒细胞表面CD11b(FCM法)和血清 白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素18、 TNF-a、 VCAM-1水平(ELISA法)。流式细胞术检测各组大鼠中性粒细 胞表面CD11b MFI表达。 ; 主要观察指标：①各组大鼠血清白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素18、TNF-a、VCAM-1 水平。②各组大鼠中性粒细胞CD11b的表达水平。③各组大鼠中性粒细胞表面CD11b MFI表达。 统计学分析：采用SPSS 10.0及Excel 2003 统计学软件完成。组间比较采用方差分析，P 0.05为差异有显著性意义。 ;结果 ;各组大鼠中性粒细胞表面CD11b的表达水平 模型组CIA大鼠中性粒细胞表面CD11b的表达水平明显增高 (P 0.05)；Uc-MSC治疗后第35天中性粒细胞表面CD11b 的表达水平有显著改变(P 0.05)，流式细胞术检测中性粒、 细胞表面CD11b，见图2，3。 ;;; 讨论 ;间充质干细胞具有很强的趋向炎症和损伤部位特性，在动物 实验被证实。间充质干细胞这种在体内微环境的作用下主动 迁移(即损伤趋化作用)到受损伤部位进行修复称为间充质干 细胞的 “归巢”作用。在体外间充质干细胞介导的免疫调节作 用的研究中发现，间充质干细胞通过T细胞、B细胞、DC细 胞、以及NK细胞等多个环节完成机体免疫调节作用，调节细 胞因子的表达。而类风湿关节炎的病理基础主要是由T细胞 介导涉及B细胞、细胞因子、细胞凋亡、蛋白酶等多种因素 所致自身免疫性疾病，因此，应用间充质干细胞治疗而干预 RA炎症病理基础成为可行。 ;实验发现经Uc-MSC治疗后的CIA大鼠血清白细胞介素1、白细胞 介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子a、VCAM-1水平较模型组 有不同程度的降低，可见间充质干细胞能够通过其趋化作用到达 炎症部位，进而通过对T细胞及B细胞的免疫调节作用进行调控， 从而抑制炎症因子的表达。且CIA大鼠中性粒细胞表面CD11b平均 摄取率明显低于模型组，影响CIA大鼠中性粒细胞表面CD11b表达 峰值，使其明显左移，提示Uc-MSC能使炎症因子及中性粒细胞表 面CD11b的表达降低，抑制类风关病理性炎症因子释放及???皮细 胞的异常活化，使炎症因子及中性粒细胞表面CD11b的表达降 低，有利于缓解症状和改善RA的免疫炎性。因此，作者认为上述 因子可作为评价Uc-MSC临床治疗效果的实验指标。 实验初探Uc- MSC治疗RA的结果，反映间充质干细胞干预RA致病性炎症因子 释放及内皮细胞的活化作用，有利于修复RA免疫炎性致畸性关节 功能异常。 ;