超临界流体色谱法.pptVIP

色谱柱 ①填充柱 填充柱与HPLC柱相似，基于分配平衡实现分离，柱长可达25cm，分离柱内径0.5-4.6mm。使用粒径为3-10μm的填料填充。如硅胶、-NH2、-CN及C18、C8等化学键合相均可用于SFC。其中以极性填料的分离效果更好。SFC在手性化合物的分离上效果优于HPLC。 在实际操作中，往往会因压力变化而产生较大的柱压降，使柱入、出口处的保留时间有很大差异，所以一般采用高于超临界压力20%左右的压力以减小影响。在填料的选择上也要注意与所分析的样品相适应，如分析极性或碱性化合物时，填料覆盖度小，会产生不对称峰。若使用“封端”填料则会得到改善。 填充柱在重现性、载样量等方面要优于毛细管柱，操作简便，也有用微填充柱的，将3-10μm的填料填充到内径几个毫米或更小的毛细管柱中。 ②毛细管柱 较长用的填充毛细管柱内径≤0.5mm，柱长为10-30mm；开管毛细管柱主要是内径为50-100μm化学交连的各种硅氧烷柱或其它类型的交连柱。 SFC色谱柱必须借助柱箱以实现精确的温度控制，范围可以从室温至450°C，同时配低温控制系统，可在-50℃以下工作。 ①使用气相色谱检测器，以FID为多用，应用时可将色谱柱的流出物分流，部分流出物通过限流器变为气态进入检测器，若用FID检测时，流动相中不能加入改进剂，否则改进剂本身将给出信号干扰测定，FID对小分子量化合物可得到很好的结果，对分子量大的化合物常得不到单峰，而是一簇峰。如把检测器加热可使分子量大于2000的化合物获得满意的分离。 在SFC中也可以使用氮磷检测器（NPD）、火焰光度检测器（FPD）等。 三、超临界流体色谱的流动相和改性剂 （一）流动相 SFC的流动相为超临界流体。超临界流体的主要特点是在不同压力下对各种样品有不同的溶解能力。其溶解度随超临界流体密度的增加而增加。当两组分的溶解度常数越接近时，，其互溶性就越好。有人研究认为，几种常用的超临界流体的溶解能力在相同的压力条件下顺序是乙烷二氧化碳氧化亚氮三氟甲烷，在相同条件下其分离能力是：＜二氧化碳＜氧化亚氮＜三氟甲烷≈乙烷。 对于SFC流动相的选择应综合考虑。除溶解性能外，还要与检测器相适应，CO2是最常用的流动相。其临界温度低、压力适中，容易操作，相对便宜，无毒无嗅，安全性好，且在190nm以上无紫外吸收。 标准溶液的配制，取齐墩果酸对照品适量，加二氯甲烷溶解，并稀释成浓度为1.921mg/ml的标准溶液。 标准曲线的绘制 精密量取齐墩果酸标准液（1.921mg/ml）0.4，0.8，1.2，1.6，2.0及2.6ml，分别置平底烧瓶中，挥去二氯甲烷后，各加2mol/L盐酸20ml 后按样品分析方法操作，以齐墩果酸与内标的峰面积比对进样浓度进行回归，其回归方程主：Y=1.7018×10-3+0.3392X、γ=0.9998。 样品测定 精密称取天麻丸（胶囊内药粉）约1g，每加2mol/L，HCL20ml,超声振荡15分钟，加热回流水解2小时，冷却后滤过，弃去滤液，滤液用蒸馏水洗至中性，烘干，加氯仿20ml振摇后水浴回流1小时，趁热滤过，用少量氯仿（2~3ml）冲洗滤纸，回收并挥干氯仿，备用。测定前精密加入1ml二氯甲烷及1ml甲羟孕酮内标准溶液，溶解后进样测定，计算齐墩果酸与内标的峰面积比，代入标准曲线的回归方程，计算齐墩果酸含量，得含量为0.126%，回收率为94.82%，RSD为2.51%. * * 超临界流体色谱法 超临界流体色谱(supercrical fluid chromatography,SFC)是以超临界流体作为流动相的色谱方法，是20世纪80年代以来发展迅速的一个色谱分支，所谓超临界流体，是指在高于临界压力和临界温度时的一种物质状态。它既不是气体，也不是液体，但它兼有气体的低粘度、液体的高密度以及介于气、液之间较高的扩散系数等特性。从理论上说SGC既可以分析GC法难以处理的高沸点、不挥发性样品，又有比HPLC法更高的柱效和更短的分离时间，且可使用二者常用的检测器，也可与MS、FT-IR光谱仪等在线联接，因而可以方便地进行定性、定量分析。在中药药物分析领域已有愈来愈多的应用。 一、超临界流体色谱的特点与原理principle and character of supercritical fluid chromatography 1．超临界流体的特性。 对于某些纯物质来说，具有三相点和临界点，如图所示，从图中可以看出，物质在三相点，气、液、固三态处于平衡状态，当处于临界温度和临界压力以上时，则不论施加多大压力，气体也不会液化，此时即非气体，也非液体，而是以超临界流体形式存在。 超临界流体对于分离具有极其有用的物理性质，这些性质恰好介于气体和液体之间。表对气体、液体、和超