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6酵素活性测定.PDF
生化科技學系 酵素純化與分析 6
6 酵素活性測定：
6.1 催化反應：
a. 反應設計原則：
大部分酵素反應方式，都可包括在圖6.1 的大綱中。建立酵素活性測定步驟時，請注意
以下原則︰
(1) 測定生成物的產生量，比測基質(反應物) 的消失量，更方便且靈敏。除非不得已，儘
量避免測定反應物。
(2) 反應流程儘量簡單，太複雜的操作過程，增加工作量及成本，且容易造成失誤。
(3) 複雜的反應，可能產生某些意外的生成物 (或pH 改變) ，回饋抑制酵素反應 (圖6.1 中
以負號表示) 。
(4) 反應條件必須有利於指定反應方向，可以移除生成物
(以籃框表示) 或連上耦合反應。
(5) 小心樣本中有無其他酵素
(或抑制劑) 干擾，會因為消耗反應物或生成物，加強或減弱
目標酵素的活性，造成假象而誤判。
b. 反應基質及酵素濃度：
在試管中進行的酵素活性分析，與生物体內的酵素反應，有相當差距。為使反應達最大
活性 (Vmax) ，或往指定方向進行，所使用基質濃度為十倍Km 。反應的最適pH 、溫度、
時間等條件，均需以實驗求得，尤其酵素的用量影響結果甚鉅，要事先找出最適當的使
用濃度。
EPA 2018 71
酵素純化與分析 6 國立臺灣大學
c. 不要忘了基本的酵素動力學：
本課程的主旨是在探討酵素的純化技術與分析方法，對於酵素的催化行為以及所衍生的
基礎知識，並沒有討論很多。 但是，不要忘了後者才是研究酵素的最終目的，由簡單的
動力學分析，就可以得知許多酵素與其基質間的作用關係，以及酵素催化的分子機制，
請務必要体會這一點提醒，也要隨時回顧基本的酵素動力學。
6.2 酵素活性分析：
酵素活性的偵測，通常是固定在一段時間 (t) 內，觀察生成物 的產量(P) 。因此反應進
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