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酶免疫测试（EIA）技术 一、酶免疫测试（EIA）技术分类 二、ELISA技术方法与原理 （1）ELISA特点：在固相表面组装免疫活性物质形成免疫吸附剂；酶标记免疫活性物质，进行信号放大；有二步温育反应二次洗涤过程；灵敏度特异性相对较高。 （2）ELISA局限性：只能检测到ng水平，精密度差（批内CV15-20%）；线性范围窄（一个数量级）。 （3）根据检测目的和操作步骤不同有三种基本方法：双抗体（原）夹心法 ；间接法；竞争法 ELISA测试原理 三、自动化酶标仪基本工作原理 四、ELISA操作步 五、ELISA质量控制 （一）的测试前标本的采集和保存 （二）仪器质控 （三）分析中质控 六、ELISA操作注意事项 七、影响ELLSA测试结果常见问题原因及解决方法 八、、RT-2100C型多功能酶标仪仪器特点： 九、RT-2100C型多功能酶标仪常用测试项目 （1）肝炎类：甲肝抗体IgM、乙肝两对半、丙、丁、戊、庚性肝炎抗体等 （2）传染病类：爱滋病、衣原体、肺炎支原体、腺病毒、幽门螺旋杆菌、腮腺炎、麻疹、水痘、百日咳杆菌、流行性出血热、狂犬病等。 （3）肿瘤标志物类：卵巢癌、乳腺癌、胃肠道癌、癌胚抗原、甲胎蛋白、膀胱癌、铁蛋白等。 （4）内分泌类：T3、T4、促卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)、人绒毛促性腺激素(HCG)、睾酮(TESTO)、孕酮(PROG)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、生长素(HGH)、促甲状腺素(TSH)、皮质醇或皮质酮(C)、促红细胞生成素(EPO)等。 （5）自身抗体类：ENA全套6项筛选、抗核抗体、抗Sm抗体、抗精子抗体、抗双链/单链DNA、红斑狼疮筛选等。 （6）Torch类、病毒感染类：弓形虫、巨细胞病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒等。 （7）细胞因子类：白细胞介素、可溶性CD抗原。 十、RT-2100C型酶标仪基本操作步骤 * * 翁 锡 全 广州体育学院 酶免疫分析技术（enzyme immunoassay,EIA）是继荧光免疫技术和放射免疫技术之后建立的一种非放射性免疫技术，是将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用相结合，发展建立的一种非放射性标记的免疫性标记分析方法。酶免疫分析系统则属于开放式的，符合标准的各种品牌的ELISA试剂盒均可应用，且有灵敏度高、特异性强、酶免疫试剂的性质比较稳定、操作方法简便、快速、无放射性污染以及应用范围广等很多优点。 酶免疫分析技术 非均相酶免疫分析 均相酶免疫分析 非均相液相酶免疫分析 非均相固相酶免疫分析 以聚苯乙烯制品作为载体的酶联免疫吸附实验---ELISA 1）将链霉亲合素包被的聚苯乙烯塑料试管安置固定。 2）将生物素标记的特异性抗体和待测抗原加入链霉亲合素包被小管内，经温育，生物素和亲和素发生连接，待测抗原和特异性抗体发生结合，形成固相包被亲合素-生物素-特异性抗体-待测抗原复合物，然后进行洗涤，除去未结合的抗原和生物素标记抗体。 3）加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的特异性抗体(酶标抗体)，经温育形成固相包被链酶亲合素-生物素-特异性抗体-待测抗原-酶标抗体复合物，再次进行洗涤，除去多余的酶标抗体。 4）加入底物ABTS和H2O2，经温育，ABTS在辣根过氧化物酶的作用下显色，然后经波长450nm的光度计测定获得A值，从标准曲线上计算出待测抗原的含量。 光源 光路 微孔板 触摸屏电源 单 A/D转换 程控放大器 多路开关 光电检测 显示器 片 打印机 步进电机驱动 步进电机 送样机构 电源  机  图2 工作原理方框图 电源 （1）试剂的准备 （2）加样 （3）保温 使用恒温水箱 使用保温箱 （4）洗涤 （5）比色 （1）可作标本广泛，体液（如血清，血浆，各种积液），分泌物（如唾液）和排泻物（如粪便，尿液）均可。 （2）标本采集时应尽量避免溶血，否则造成假阳性；长菌的标本同样的道理易产生假阳性。 （3）抗凝不完