溶酶体介绍.ppt

第六章 溶酶体 那么什么是酸性磷酸酶呢？ 酸性磷酸酶（acid phosphatase EC3.1.3.2）酸性磷酸酶是一种在酸性条件下催化磷酸单酯水解生成无机磷酸的水解酶。人血清酸性磷酸酶的最适pH为5~6，最适作用温度37℃ 酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于巨噬细胞，定位于溶酶体内。ACP测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。 临床意义 正常人血清中的酸性磷酸酶来源于骨、肝、肾、脾、胰等组织，故不论男女老幼，其含量大致相同。而前列腺患者以及出现肝炎、甲状旁腺机能亢进、红血球病变等疾病时，血清中酸性磷酸酶的活力都会升高。为了鉴别血清中增加的酸性磷酸酶是来自前列腺还是来自其他器官，必须加以区别。为此可进一步采用某些抑制剂进行选择性抑制作用。例如：乙醇和酒石酸对前列腺酸性磷酸酶有显著的抑制作用，而对红血球酸性磷酸酶的抑制作用较弱。 顺便科普一下彗星实验 彗星实验又称单细胞凝胶电泳实验，是由Ostling等于1984年首次提出的一种通过检测DNA链损伤来判别遗传毒性的技术。它能有效地检测并定量分析细胞中DNA单，双链缺口损伤的程度。当各种内源性和外源性DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时，其超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质、RNA以及其他成分均扩散到细胞裂解液中，而核DNA由于分子量太大只能留在原位。 在中性条件下，DNA片段可进入凝胶发生迁移，而在碱性电解质的作用下，DNA发生解螺旋，损伤的DNA断链及片段被释放出来。由于这些DNA的分子量小且碱变性为单链，所以在电泳过程中带负电荷的DNA会离开核DNA 向正极迁移形成“彗星”状图像，而未受损伤的DNA部分保持球形。 DNA受损越严重，产生的断链和断片越多，长度也越大，在相同的电泳条件下迁移的DNA量就愈多，迁移的距离就愈长。通过测定DNA迁移部分的光密度或迁移长度就可以测定单个细胞DNA损伤程度，从而确定受试物的作用剂量与DNA损伤效应的关系。该法检测低浓度遗传毒物具有高灵敏性，研究的细胞不需处于有丝分裂期。同时，这种技术只需要少量细胞。 Chapter 6 Lysosome 溶酶体 二、溶酶体的存在状态与类型 一、基 本 特 性 五、溶酶体的功能 四、溶酶体与疾病 三、溶酶体的发生 基本特性 单层膜包围 多种酸性水解酶 溶酶体 1955年, C. de Duve： 酸性磷酸酶活性 ——溶酶体(lysosome) 溶酶体 形态和大小 溶酶体的电镜形态 形态 溶酶体 大小 (最小：0.05?m 最大：数?m 平均：0.5?m) 一般：0.2~0.8 ?m ①膜蛋白高度糖基化 ②含有多种载体蛋白 ③膜中嵌有质子泵(H+-ATPase) 溶酶体膜在成分上与其它生物膜不同: 溶酶体 溶酶体 溶酶体的类型 新形成 未同消化物融合 水解酶处于贮存状态(潜伏状态)，球形 溶酶体 (生理状态) 复合小体 较大，形状不规则 且含有颗粒或膜碎片 含有消化不了的残留物 残余小体 (residual body) 或三级溶酶体 (tertiary lysosome) 次级溶酶体 (secondary lysosome) 初级溶酶体 (primary lysosome) 溶酶体酶转 运小泡 ? ! 溶酶体 细胞中酸性水解酶分布电镜图 酸性水解酶是溶酶体的标志酶,含酸性水解酶的膜泡即为溶酶体 新生溶酶体酶小泡 次级溶酶体(正在进行消化) 故ACP测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。 (1)前列腺癌：尤其是转移癌ACP明显升高。PAP对前列腺癌的诊断较ACP敏感，二者对晚期前列腺的诊断、疗效观察及预后监测价值更大。 (2)血液病：粒细胞白血病、高雪病、尼曼匹克病、原发性血小板减少性紫癜、溶血性贫血等ACP活性亦增高。 (3)非恶性前列腺疾病：前列腺炎、前列腺肥大、前列腺梗死等ACP活性也增高。 (4)骨疾病：变形性骨炎、成骨不全、软骨病、骨肉瘤、多发性骨髓瘤及某些非前列腺恶性肿瘤的骨转移，ACP活性也可升高。[1] (5)其他：甲状腺功能亢进，急、慢性肾炎、尿潴留等ACP活性可增高。 吞噬过程图解 溶酶体酶小泡 次级溶酶体 吞噬 溶酶体 人肺泡巨噬细胞中髓样小体——残余小体电镜图像 老年斑——脂褐质小体 溶酶体 溶酶体的发生 溶酶体酶的特异性信号为甘露糖6-磷酸(M6P)； 信号斑 信号肽 信号肽与信号斑的结构图解 磷酸转移酶有识别信号：依赖于溶酶体酶三级结构所形成的信号斑(signal patch) 溶酶体 溶酶体酶的识别机制： 溶酶体水解酶的识别机制 GlcNAc磷酸转移酶的催化UDP-GlcNAc的GlcNAc-P转移到溶酶体水解酶的甘露糖残基上，形成了具有M6P的溶酶体酶 溶酶体 (M6P)