高效液相色谱法16.ppt

高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography （HPLC） 前言: 我国： 开始仅为少数研究实验室拥有， 现很多的生产、研究、质检部门。 广泛应用于质量控制、分析化验、制备分离。例： 讲课目的：入门 教材问题： 学习要求： 参考书籍： 1.色谱理论基础（卢佩章、戴朝政编） 2.高效液相色谱法（邹汉法、张玉奎、卢佩章编著） 3.高效液相色谱方法及应用 （色谱技术丛书、化学工业出版社、 于世林编著) 本课程基本要求： 1. 掌握色谱法的分类及有关术语； 2. 了解柱效的影响因素； 3. 掌握分离度的影响因素； 4. 了解定性、定量分析方法； 5. 掌握液相色谱仪的基本结构及功能； 6. 掌握常用的液相色谱法基本概念及分离 　对象 7. 掌握液相色谱的基本操作技能； 现代液相色谱分析方法。 经典液相色谱法为基础， 引入气相色谱法的理论和实验技术， 高压输送流动相， 高效固定相及高灵敏度检测器. 液相色谱仪 三、色谱法原理 混合物中各组份在不同的两相中溶解,吸附等化学作用性能的差异,当两相相对运动时,使各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离 两相中一相是固定的,叫作固定相(Stationary Phase), 一相是流动的,称为流动相(Mobile Phase), (洗脱剂,溶剂) 分离原理: 五、HPLC与GC区别 1．分析对象的区别 GC：适于能气化、热稳定性好、沸点低的样　 品， 占有机物的20% HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品. 　　　 对分子量大、难气化、热稳定性差　　 样品均可检测 。 占有机物的80% 2．流动相的区别 GC：流动相为惰性，组分与流动相无亲合作用 力，只与固定相有相互作用。 HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用 力，能提高柱的选择性、改善分离度. 对分离起主要作用。 3．操作条件差别 4.分析样品区别 GC：加温操作 GC：破坏样品，不能回收 HPLC：室温；高压 HPLC：不破坏样品，能回收 说明：气相、液相地位同样重要 两种互补不足的色谱方法 灵敏度：气相﹥液相 应用范围：液相﹥气相 六、色谱法的分类 吸附色谱(Absorption Chromatography) 组分对固定相表面吸附力的不同而分离 分配色谱(Partition Chromatography) 组分在固定相和流动相中的溶解度不同而分离 离子交换色谱(Ion Exchange Chromatography) 组份离子交换亲和力的差异而分离 体积排除色谱(Size Exclusion Chromatography) 组分分子量大小不同,对固定相的渗透力不同而分离 色谱过程特点： ①浓度对分离时间呈高斯曲线型 ②色谱条件一定时，各组分都有一特定时间在图谱中出现，称为组分的保留时间。 ③柱效一定时，组分保留值越小，峰越 窄；保留值越大，峰越宽。 ④相邻峰的保留时间相差越大，越易分离。 分配系数K 的讨论 作业： 思考题: 1、2、3、4、5、6、8、9 理论塔板高度H 说明： 柱外因素 ①检测器流动池体积（尽量小） ②柱出口到检测器的连接管（尽量短） ③进样器死体积 2. 速率方程式（范·弟姆特方程式） H = A + B/u + C·u H：理论塔板高度， u：流动相流速(cm/s)。 减小A、B、C 三项可提高柱效。 A，B，C 三项各与哪些因素有关？ (3) 为色谱分离和操作条件选择提供了理论指导。阐明了流速和填料对柱效及分离的影响。 (4) 各种因素相互制约：流速增大，分子扩散项的影响减小，使柱效提高，但同时传质阻力项的影响增大，又使柱效下降； 选择最佳条件，才能使柱效达到最高。 4.获得高柱效的几种方法： ①选用细的颗粒填料 ②流动相流速低 ③流动相粘度小 ④升高温度 ⑤溶质扩散系数与其结构有关 ⅰ大分子，扩散系数小 ⅱ小分子，扩散系数大 对浓度不同组分而言： 两个组分的分离度会随浓度比的增大而 减小 例： 对多组分而言： 整个色谱分离的分离度取决于Rs最小值的两个峰。 四．控制分离度方法 ①改变k’ 调节溶剂强度可以改变k’ 增大ｋ’---使用较弱溶剂 降低ｋ’