中药制剂发酵前后成分的变化及对肉鸡部分免疫指标和生长的影响.docVIP

中药制剂发酵前后成分的变化及对肉鸡部分免疫指标和生长的影响 摘 要:采用HPLC法检测中药制剂发酵前后成分的变化,通过饲喂肉鸡试验对发酵前后制剂的应用效果进行比 较。通过检测分析,中药中的一些成分经过发酵后含量增加1~4倍。并且产生了某些新的特征吸收峰,同时发酵 前的几个特征吸收峰消失。肉鸡饲喂试验结果显示,中药发酵制剂组抗新城疫病毒的抗体效价、免疫器官指数、血 细胞中RBC数量均高于未发酵制剂组,差异显著(P0.05),且饲料利用率比未发酵制剂组明显提高。表明中药 制剂经过发酵后成分发生了变化,增加了某些新的药物成分,应用效果优于未发酵的制剂。 关键词:中草药发酵制剂;成分变化;肉鸡;生产性能 中图分类号:S853.73 文献标识码: A 文章编号: 0366-6964(2005)11-1223-05 收稿日期:2004-11-04 基金项目:国家/十五0科技攻关项目(2002BA514A-2-1-3) 作者简介:韩春杨(1972-),男,河北人,硕士生,主要从事兽医微生物 与免疫学研究。E-mail:luckyhcy@163.com *通讯作者:牛钟相,E-mail:zxniu@ 近年来,中药在动物疾病防治中的应用十分广 泛,发挥了巨大作用。随着中药制剂研究的深入发 展,国内开展了通过微生物发酵手段以改革传统中 药炮制方法的研究,并取得了一定进展[1~3]。通过 微生物的降解作用,使药物的有效成分、活性物质能 最大限度地提取出来,从而得以增强药效、减少用 量、降低原料药的成本。本试验采用具有免疫增强 作用的一组中药方剂,对其进行发酵,制成中药发酵 制剂。利用HPLC法对发酵前后成分的变化进行 了比较,并通过肉鸡饲喂试验对中药制剂发酵前后 的免疫增强效果等进行了对比,取得了满意的结果。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 药物与试剂 中药制剂:由黄芪、党参、茯 苓、山楂、麦芽和白术组成;中药发酵制剂系将上述 中药制剂进行发酵制成。乙腈(色谱纯);重蒸水;磷 酸盐缓冲液(pH3.25);新城疫Ⅳ系疫苗(齐鲁动物 保健品有限公司生产)。 1.1.2 试验动物 1日龄艾维茵肉用雏鸡150只, 泰安市种鸡厂提供。 1.1.3 主要仪器 Waters515高效液相色谱仪,色 谱数据处理:N-2000双通道色谱工作站;血液细胞 自动分析仪F-820:日本希森美康株式会社生产; PHS-2C型酸度计;高速离心机等。 1.2 方法 1.2.1 发酵前后成分的检测 发酵制剂的制备:取粉碎的中药制剂100 g,加入200 mL水,置于500 mL三角瓶中,121e, 15 min高压灭菌。按照2%的接种量接入制备好的 菌液,37e培养48 h,备用。 待检样品的预处理:将发酵前后的液体样 品分别以8 000 r/min离心5 min,取上清液用0.45 Lm的微孔滤膜过滤,备用。 液相色谱条件:色谱柱:钻石C18 (250 mm @4.6 mm,5Lm);检测器:Waters2487紫外双波长检测 器;流动相:A(pH3.25的磷酸溶液),B(乙腈),二元梯 度洗脱,梯度洗脱条件为:0~5 min,A(%)10~10,B (%)90~90;5~25 min,A(%)10~20,B(%)90~80;25 ~27 min,A(%)20~30,B(%)80~70;27~38 min,A (%)30~35,B(%)70~65;38~40 min,A(%)35~40,B (%)65~60;40~50 min,A(%)40~40,B(%)60~60, 见表1;检测波长:280 nm;检测柱温:25e;灵敏度:0.8 AUFS;流速:1 mL/min;样品进样量:5LL。 1.2.2 动物试验 将150只1日龄艾维茵肉鸡随 机分为5组,每组30只。在2~6日龄和25~30日 龄时分别投药两次,A组按饲料量1%的用量添加 中药制剂,B、C、D组分别按1%、0.5%和0.25%的 用量添加中药发酵制剂,E组为不添加任何药物的 空白对照组,按常规方法饲养。畜 牧 兽 医 学 报36卷 表1 梯度洗脱的条件 Table 1 Conditions of gradiont elution 时间 Time/min 磷酸溶液/%(pH3.25) Phosphate solution 乙腈% Acetonitrile 0 10 90 5 10 90 25 20 80 27 30 70 38 35 65 40 40 60 50 40 60 1.2.3 饲喂效果检测指标 新城疫抗体水平检测:于7、21日龄用新 城疫Ⅳ系疫苗进行常规免疫,分别在19和35日龄 时检测抗新城疫疫苗抗体水平。测定方法采用B-微 量法所测定的NDV的血凝抑制(HI)抗体,结