平面色谱法课件.ppt

含粘结剂固定相： 硅胶G——含13%~15%煅石膏 制备硅胶G——含30%煅石膏 氧化铝G——含9%煅石膏 不含粘结剂固定相：硅胶H （三）粘结剂 加强固定相颗粒的附着力，增加薄层板的润湿性 1）无机粘结剂：煅石膏 二、吸附薄层色谱材料 2）有机粘结剂： 羧甲基纤维素钠（CMC） 0.8%CMC溶液配匀浆涂铺的薄层板强度高，色谱分离性能好 注意：不适合浓硫酸显色，易霉变降解 （三）粘结剂 二、吸附薄层色谱材料 作用：适当波长激发光照射下可以产生均匀的荧光背景，清晰显示化合物的暗斑 短波荧光指示剂： 254nm 锰激活的硅酸锌；钠荧光素，阴极绿 长波荧光指示剂： 365nm 银激活的硫化锌、硫化镉；彩蓝 （四）荧光指示剂 二、吸附薄层色谱材料 硅胶H——不含粘合剂 硅胶G——硅胶和煅石膏混合而成 硅胶HF254——不含粘结剂，含荧光指示剂 254 nm呈现强绿色荧光背景 硅胶GF254——同时含粘结剂和荧光指示剂 254 nm呈现强绿色荧光背景 硅胶HF254+365——不含粘结剂，含荧光剂 254 nm和356 nm呈现荧光背景 （五）展开剂 二、吸附薄层色谱材料 石油醚环己烷四氯化碳苯甲苯二氯甲烷 氯仿 乙醚 乙酸乙酯 丙酮 正丙醇 乙醇 甲醇 吡啶 酸 水 1、常用展开剂（按极性从小到大） 首选单一溶剂，再选混合溶剂（由简至繁） 若二元溶剂系统不够理想可考虑多元溶剂系统 2、展开剂的选择： （五）展开剂 极性组分——吸附活性小的薄层板，极性大的展开剂 非极性组分——吸附活性大的薄层板，极性小的展开剂 2. 展开剂的选择： （五）展开剂 以感兴趣Rf值是否在0.3~0.5间为衡量标准 氯仿 展开 选极性强的展开剂或加入一定的极性溶剂，如乙醇、丙酮，会使Rf值变大 Rf值太小 Rf值太大 选极性弱的展开剂或加入一定的极性小的溶剂，如环已烷、乙醚，会使Rf值更小 ①酸性组分——加入一定比例的酸，可防止斑点拖尾 ②碱性物质——氧化铝为吸附剂，中性溶剂为展开剂 硅胶为吸附剂，碱性展开剂 四、薄层色谱操作过程 四、薄层色谱操作过程 1、材料准备 (1) 选板：玻璃板、塑料膜、金属铝箔 表面光滑、平整清洁 (2) 固定相（吸附剂） 粘合剂：CMC-Na、煅石膏、淀粉等 (3) 流动相（展开剂） (4) 显色剂 四、薄层色谱操作过程 2、薄层制备（铺板） → 1份吸附剂+3份粘合剂+水 →调成糊状，均匀涂布薄层板 涂铺方法： 倾注法 、平铺法、涂铺器 、喷雾法 吸附剂活性越高，活性级别越低；最好二级或三级 不可将刚涂布好的薄层板立即烘烤活化 3、活化 四、薄层色谱操作过程 铺成的薄层，置于水平台面上晾干或热风吹干 薄层放置110℃烘30min，干燥器中备用 4、点样 溶解试样的溶剂尽量避免用水 配置试样浓度约为0.01%~0.1%点样 四、薄层色谱操作过程 点样装置：容量毛细管；自动薄层色谱点样仪 点样原点应小而圆，距板边缘2cm 多次点样（每次挥干后），防止扩散效应 点样量勿超载，防止拖尾 点样勿伤及薄层表面 5、展开 四、薄层色谱操作过程 （1）展开装置 立式 卧式 展开原理：薄板一端浸入展开剂，点样点不可接触展开剂，展开剂借助毛细作用上升，带动样品中组分的迁移。 常为圆形或方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖，应能密闭。 5、展开 四、薄层色谱操作过程 （2）展开方式 软板只能进行近水平展开 硬板可近水平、下行、上行、径向、双向、多次展开， 上行法展开最为常用 5、展开 展开室预先用展开剂饱和（平衡系统，减少边缘效应） 点样薄板一端浸入展开剂展开（距边缘0.5~1 cm） 展开至一定距离后取出薄板 挥尽溶剂 四、薄层色谱操作过程 （3）展开过程 * 6、定位 光学检出法：直接观察、荧光显示技术 试剂显色法：喷雾显色法，浸渍显色法 四、薄层色谱操作过程 薄层色谱常用通用型显色剂 碘蒸气法 10%硫酸乙醇溶液 0.05%荧光黄甲醇溶液 定位方法 ——测出Rf值 相同条件下展开，与已知标准物质对照进行定性鉴别。 7、定性分析 四、薄层色谱操作过程 对未知样品，要几个展开体系均有一