第四讲细胞培养的生长条件和细胞培养室.ppt

课程回顾和思考 上皮型细胞 扁平，形态较为规整，细胞大致呈多角形，胞体近中央处有扁圆的细胞核；细胞之间相互衔接或呈镶嵌状紧密排列；当细胞紧密排列时,细胞可为六角形或多角形，因为相互拥挤而呈现“铺路石样”，局部可构成单层的上皮样“膜片组织” 成纤维型细胞 细胞呈梭形、长条形、多角形或不规则形，后两种情况下常具宽扁胞质突起(片状伪足)；胞质近中央处有椭圆形胞核，胞体一般铺展很开。多数情况下，细胞之间排列疏松，有较大细胞间隙。有时也见相互平行排列，成群细胞呈现放射状、漩涡状等走行形式 游走型细胞 细胞相互分,一般不形成群落；细胞内易出现色暗的吞噬性颗粒，常具有胞质突起(伪足)。这类细胞在培养器皿壁上生长的位置不固定，经常处于较活跃的变形及游走状态，因此外形不规则且不断变化。 多形型细胞 多形型细胞是一些形态上不规则的细胞，但它不像成纤维细胞型的细胞那样，不规则形态由宽扁的胞质突起所致。其细胞一般分胞体和胞突两部分。胞突为细长形，似丝状伪足。胞体虽略呈多角形，但没有成纤维细胞型那样不规则。 体外培养细胞的整个生命活动过程分期 每一代细胞的生长过程分期 第四讲 动物细胞体外培养的生长条件和培养设备 一、所需营养 营养条件是细胞体外生长的基本条件。 在培养液中，除了细胞生命活动所需的各种营养物质之外，还必须提供调节细胞生长与功能活动的激素、生长因子以及生长基质成分等。 1、氨基酸 蛋白质合成的原料 12种必须氨基酸 谷氨酰胺（每种细胞都需要） 作用：（1）促进氨基酸进入细胞膜； （2）为嘌呤和嘧啶提供氮来源 ； （3）合成三、二、一磷酸腺苷所 必需原料 注意：-20℃保存谷氨酰胺，4℃2周就会失效 2、碳水化合物 能量来源 六碳糖（葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、山梨糖） 葡萄糖最适合细胞吸收 半乳糖最难被细胞吸收 3、无机盐 Na+、Mg2+、Ca2+、Cl-、SO42-、PO43-、HCO3等无机离子 作用：1、维持细胞渗透压； 2、调节细胞膜功能； 3、是合成维生素、激素和酶的原料 4、维生素 细胞生长必不可少 大多做为辅酶、辅基 分为脂溶性和水溶性两种 脂溶：A、D、E、K 水溶：B族和C族（精米精面与五谷杂粮） 血清能提供维生素，但是还需再添加一些其他维生素 5、促生长因子和激素 传递各种信息 调节细胞代谢 保持细胞状态 促进细胞增殖 来源：血清 培养基中基本都会添加5%--20%的小牛血清 6、其他成分 微量元素：铁、锌、硒 ； 铜、锰、钒 现有的文献并没有明确规定要加入，或许加入的非限定物血清中含有。 促细胞贴附物质：对悬浮型细胞无效 并非必需 但有促进作用 一些其他物质：丙酮酸钠 2-巯基乙醇 2-巯基乙醇（2-Me）：含巯基，能将含S化合物还原成谷胱甘肽 诱导细胞增殖 避免过氧化物损害细胞 介导DNA合成 谷胱甘肽 抗氧化剂和自由基清除剂，还能调节其他氧化剂； 谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸三者结合而成； 解毒：能和芥子气、铅、汞、砷等重金属盐络合，达到整合解毒 二、培养细胞的生存环境 体外培养动物细胞最常用的温度是37℃。培养的细胞总的来说对较低温度的耐受能力比较高温度(一般不超过39℃)的强。高于生理温度阈值时，温度越高，对细胞损伤越大。 培养的细胞处在39～40℃下1h，即会受到一定的损伤，但仍然可以恢复；在41～42℃下lh，细胞便会受到严重损伤，绝大多数细胞将死亡；当培养温度高达43℃时，1h内将使得全部细胞死亡。 高温对细胞造成的损伤程度与暴露的时间长短也有关。 2.高温的影响 (1)高温破坏了细胞内的酶 (2)高温能破坏细胞膜上的脂类 (3)高温影响细胞分裂 生物体耐受高温原因 (1)酶的变化 (2)与原先的生活环境温度有关 (3)与脂类物质的熔点有关 (4)营养状况 3.低温的影响 培养细胞对低温的耐受力较之对高温的耐受力要强。在生理温度范围内，温度越低，酶活性越低。当温度降至细胞所能忍受的最低限度时，细胞的生命活动即会受到抑制。 低温条件能使细胞的核分裂时间延长。 低温条件还能使细胞的代谢活动降低 不同细胞能够忍受的低温阈值不同，能够忍受低温环境的时间长短不同。 低温条件能造成一定的细胞死亡。 （二）、气相环境对细胞生长的影响 培养细胞的气相环境尤其是Ｏ2和ＣＯ2对细胞生长也很有影