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网织红细胞检测进展及其临床应用 概述 网织红细胞(reticulocyte,Ret)是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞,略大于成熟红细胞。网织红细胞是有核红细胞刚刚失去核的阶段,仍属未完全成熟的红细胞,浆内尚残留有嗜碱性RNA,经碱性染料(如天青B、煌焦油蓝或新亚甲蓝)活体染色后,在包体内可见蓝色点状或网状结构,故名网织红细胞。 概述 红细胞在骨髓中生成,至发育为成熟红细胞,经历了不同阶段:干细胞、原始红细胞、早幼红细胞、中幼红细胞、晚幼红细胞、网织红细胞,最后发育为成熟红细胞。随着细胞的成熟,RNA含量逐渐减低,至细胞完全成熟后消失或接近消失,即红细胞中网线状结构越多,表示细胞越幼稚。ICSH将Ret分为4型:Ⅰ型(丝球型)、Ⅱ型(花冠型或网型)、Ⅲ型(破网型)、Ⅳ型(颗粒型)。正常生理状态下,Ⅰ型只存在于骨髓,Ⅱ型在外周血也很难见到,Ⅲ型仅有少量释放到外周血,因此外周血网织红细胞计数时以Ⅳ型为主。 概述 Ret是红细胞成熟过程中的一个重要阶段,是判断骨髓红系造血情况和疗效观察的重要指标。其检测方法既有传统的显微镜目测法,又有现代化的仪器计数法(如流式细胞仪、网织红细胞计数仪及血细胞分析仪)。现对Ret的检测进展,各检测方法的优缺点及其在临床上的应用逐一讲述。 网织红细胞检测进展 1.手工法 2.血细胞分析仪法 3.流式细胞仪法和专用网织红细胞分析仪 1.手工法 手工法分玻片法和试管法。由于玻片法容易使混合血液中的水分蒸发,染色时间偏短,因此结果偏低;试管法容易掌握,重复性较好,必要时还可以从混合血液中再取标本重新涂片复查。试管法被列为手工法Ret计数的参考方法。按卫生部《全国临床检验操作规程》第2版,采用试管法用煌焦油蓝染液对血液标本进行红细胞活体染色、制片,选择细胞分布较均匀、厚薄适中的体尾交界处,每份标本油镜下参照陈宝梁的建议 ,即Ret6 %,计数红细胞1000个;3%~ 5 %计数红细胞2000个;1 %~2% 应计数红细胞4000个;小于1 %计数红细胞10000个。 1.手工法 传统的显微镜计数方法操作较繁琐、影响结果的因素较多。近年来,国内开始使用国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的Miller窥盘进行计数,规范了计算区域,减少了实验误差,使结果准确性有所提高(卫生部临检中心建议,CV控制在15 %之内)。Miller窥盘法是将一种光学圆片状Miller窥盘安放在显微镜目镜中,窥盘中有面积比例为1:9的2个正方形计数方格,只需计数1/9小方格内的红细胞即可准确估量出整个大方格内的红细胞数量。 卫生部临床检验中心控制Ret计数CV≤15%需镜检的RBC数目 1.手工法 国内很多学者在此基础上设计了几种改良的Ret计数窥盘。张时民等设计了一种双环式结构的Ret计数窥盘,该盘的特点是小圆环和大圆环面积之比为1:10,小圆环为计数红细胞数量,大圆环为计数Ret数量。其圆形结构更加适合于人们观察和计数显微镜下细胞数量的习惯,而且此比例更加易于计算红细胞和Ret的比值。 1.手工法 陈高远则在这两种窥盘的基础上设计了改良式Miller窥盘,采用双正方形结构,小方格和大方格之比也达到1:10,只是将红细胞计数区域位移至中心部位,以方便红细胞数量的计数。 1.手工法 刘志贤设计了一种新的Ret计数窥盘即180×4扇形Ret计数窥盘:圆形直径为19 mm,圆心角∠ AOB=∠COD=∠EOF=∠ GOH=180。弧AB=CD=EF=GH=180。计算公式为:Ret %=整个计数区域内的Ret数/(4个小扇面区域内的RBC总数×5)×100% 。这种新型Ret计数窥盘4个扇形区域均匀分布在整个视野的4个方向,4个扇形面积之和是整个圆形面积的1/5,因此在理论上基本解决了红细胞分布不均匀引起的问题,降低了系统误差和随机误差 。 手工法网织红细胞活体染色染料评价 2.血细胞分析仪法 1993年以来,可进行Ret计数的血细胞分析仪相继问世,因其具有重复性好、准确度高、省时等优点,正被越来越多的医院所采用。仪器法Ret计数使用各种荧光染料和非荧光染料对Ret进行染色,采用鞘流技术和射频技术等不同原理进行检测。血细胞计数仪不仅可以计数Ret,同时还能检测出网织红细胞绝对值Ret#、网织红细胞平均体积(MRV)、网织红细胞成熟指数(RMI)等许多参数,这些参数是Ret分析、临床应用和研究的热门领域。 2.血细胞分析仪法 统计表明,仪器法测定Ret精密度有明显提高:对低Ret标本,CV值在

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