茎尖分生组织培养.pptVIP

4 茎尖分生组织培养 一、概念和意义 1.概念 茎尖分生组织培养：指对不超过0.1mm的茎尖或几十微米的茎尖进行的培养。 特点：可获无病毒苗，操作困难，成苗时间长。 普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养。操作技术简单、易成活、成苗时间短、繁殖速度快。 2.意义 茎尖培养在园艺植物离体培养中最常见，可快速繁殖无性系、培养无病毒苗、品种改良。 二、茎尖分生组织培养一般方法 1.材料的制备 健壮枝梢 去除叶片 分成1-2cm 自来水冲洗 消毒 75%的酒精30秒 0.1%升汞或20倍次氯酸钠消毒8-10min 无菌水 修剪剥离茎尖，通常切割下顶端0.2~0.5 mm叶原基的茎尖（无菌水） 接种。 2.培养基 多为MS培养基及其改良配方，还有White、B5、Heller、Gautheret等。 3.培养条件 （1）温度：26℃~28℃ （2）光照：光培养的效果通常比暗培养好。 （3）湿度：与其他器官培养相似。 4.3 脱毒苗的培育和病毒检测 一、脱毒苗的培育 （一）脱毒苗培育的意义 全世界已发现植物病毒有近700种，植物病毒病严重地影响果树、蔬菜、花卉、林木等植物的生长，造成产量降低，品质变劣，其危害仅次于真菌病害。受病毒浸染的植物终身带毒，目前尚无药物可以治愈。通过茎尖分生组织脱毒、热处理脱毒等方法可脱除植物体内病毒，恢复植物原有特性。 （二）热处理脱毒 1.原理 热处理脱毒又叫热温处理或热疗法。其基本原理是一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35-40度）既钝化失活。 2.热处理法有：温汤处理（热水浸泡）和热风处理两种。 具体方法： 第一，热水浸泡处理，适用于切下的材料，在50度左右的温水中浸渍数分钟至数小时，方法简便易行但材料易受伤。 第二，热风处理，将生长的盆栽植物移入室内或生长箱内，处理温度因植物种类、生理状况而异。一般为35~40度，短则几十分钟，长达数月。 （三）茎尖培养脱毒 1.茎尖培养脱毒的原理 （1）病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖离体培养便可获得无病毒再生植株。 必须指出的是，所谓无病毒，只是相对的，不是绝对的。 （2）茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织不能合成自身需要，生长素，细胞分裂素，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。因此茎尖越大培养成活率越高。因此对不同植物脱毒适宜的茎尖大小不同。 2.茎尖培养脱毒的方法 （1）取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与侧芽消毒接种。 消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分，最后用无菌水冲洗材料4-5次。 （2）接种 材料置10～40倍的双筒解剖镜下，解剖刀切取0.1～0.3mm带有1～2个叶原基的茎尖，接种到培养基上。 （3）培养 接种后材料置25+2℃ ，光照度1500-5000LX，每日光照10-16h条件下培养。但一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可形成大量从生芽。 3.培养基与培养方式 ： （1）培养基：常用MS， White等培养基。 （2）培养方式：茎尖培养一般采用半固体培养基 （四）、其他脱毒方法 1.热处理结合茎尖培养脱毒 2.微体嫁接脱毒 微尖嫁接技术（micrografting shoot-tip），指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖（0.14-1.0mm,带3-4个叶愿基）以培养脱毒苗的技术。 主要脱毒程序是：无菌砧木培养 茎尖准备 嫁接 嫁接苗培养 移植。 3.抗病毒药剂脱毒 二、病毒检测 主要是对脱毒苗的鉴定。方法有 1.直接测定法：直接观察待侧植株生长状态是否异常，茎叶上有无特定病毒引起的可见症状，从而可判断病毒是否存在。 2.指示植物法： 将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物作为指示植物（鉴定别寄生），用以检验待测植物体内特定病毒的存在。即指示植物法。常用鉴定指示植物有苋科植物千日红和藜属笕色藜。 特点：条件简单，操作方便，故一直沿用至今，仍为一种经济而有效的鉴定方法，只能测出病毒的相对感染力。 3.抗血清鉴定法 植物病毒是由核酸和蛋白质组成的核蛋白复合体，因而也是一种抗原，注射到动物体内即产生抗体，抗体存在于血清之中，称为抗血清。由于不同病毒产生的抗血清都有特异性，用特定病毒的抗血清来鉴定该种病毒，具有高度的专一性和特异性，几分钟至几小时即可完成，方便简易，为常用方法之一。 三、无病毒苗的保存和繁殖 （一）无病毒苗