药物制剂的微生物学检查.ppt

药物制剂的微生物学检查 无菌制剂的无菌检查 　　各种注射剂、手术用滴眼剂要求无菌、无热原质，尤其是直接注入病人血管内的注射剂，如被微生物或热原质污染即有可能引起发热、菌血症、中毒性休克甚至死亡等等。因此药典规定出厂前都必须做无菌检查以确保安全。 无菌检查的基本原则： 　　在无菌操作情况下将被检测的药品，按其剂型的不同分别取一定量加入适合各类微生物生长的不同培养基（需氧菌、厌氧菌及真菌培养基）中，在各自适宜的条件下进行培养。在规定时间内观察有无微生物生长，以判断药品是否符合要求确为无菌。 一般注射剂 　　系指本身不含任何抗菌或抑菌成分，而且其为水溶性的药品的无菌检查 特殊注射剂 油剂性药物 含抑菌或防腐成分药物 一般注射剂的无菌检查 直接接种法 需氧菌和厌氧菌的培养已全部采用硫乙醇酸钠培养基检查。在同一培养基中，需氧菌在培养基表面生长，而厌氧菌在培养基内生长。 真菌检查用真菌培养基 硫乙醇酸钠培养基 硫乙醇酸钠 还原剂 亚甲蓝 氧化还原指示剂 下层 －－ 厌氧 －－ 无色 上层 －－ 需氧 －－蓝绿色 阳性对照： 需氧菌：藤黄八叠球菌 厌氧菌：产芽胞杆菌 真菌： 白色念珠菌 方法：在培养基中加入对照菌。 意义：阳性对照必须长菌，证明微生物确实可在应用的实验条件下生长。 阴性对照： 　　用未加药物和对照菌的培养基 意义：证明培养基本身无菌。 　 　测试时用无菌操作法吸取一定量的药物加入各种培养基内在适宜的温度下培养，并每天观察作出记录。如在规定时间内无任何微生物生长则可判定待检药品符合标准. 需氧菌、厌氧菌：37℃　　５天 真菌： 25℃　　７天 特殊注射剂的无菌检查 １、油剂性药物的检测 　　油剂性药物因难于和培养基充分混合，往往影响检出结果。如果加入吐温－80，与油剂性药物混合乳化，再用培养基稀释，可以使药品均匀分布在培养基中。 对照：吐温－80 。 ２、含抑菌或防腐成分药物的检测 　　有些药品本身含有抑菌成分，或于制作过程中加入防腐剂等，如按上法检测往往不能证明它们是否真正无菌 ，必须先经一定的处理。 灭活法、稀释法、微孔滤膜过滤法和离心沉淀集菌法 口服药及外用药物的微生物学检查 口服药：细菌总数、霉菌总数、大肠杆菌、活螨的检测。 外用药：绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和破伤风杆菌。 一般眼科制剂：细菌总数、霉菌总数、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌。 均不能检出致病菌。 细菌总数测定 细菌总数，指每克或每毫升待检药品内含有的活菌总数。 它能判明待检药品被细菌污染的程度，生产单位的原料、设备及工艺流程的卫生状况。 方法：普通琼脂培养基倾注平皿计数法。 37℃，72小时 将一定稀释度的药物和琼脂培养基混合后，培养一定时间，计数平板内的菌落，根据数得菌落均值和相应稀释度的乘积，得到每克或每毫升待检药品中所含细菌总数，判断药品是否符合标准。 一般选取菌落数在30-300之间的平板计数。 霉菌总数测定 霉菌总数测定是了解待检药品每克或每毫升内含有的活霉菌总数，借以判明药品的真菌污染程度。 琼脂倾注平皿计数法 虎红培养基 25℃，72小时 选取菌落数在5-50个的平板，根据数得菌落均值和相应稀释度的乘积，得到每克或每毫升待检药品中所含细菌总数，判断药品是否符合标准。 病原菌检验 大肠杆菌 沙门菌 绿脓杆菌 金黄色葡萄球菌 破伤风杆菌 大 肠 杆 菌 大肠杆菌是人、畜肠道主要寄生菌。它随粪便排出体外，故常作为食品、饮水等被粪便直接或间接污染的指示菌。 如药品中检出大肠杆菌，表明该药品已被粪便污染，可能有肠道致病菌和寄生虫卵等病原体存在，服用后有被感染的危险性。因而，不能用灭菌方法处理的口服药物，大肠杆菌检测是常规项目之一。 检测时先把一定量药均经增菌后转种到选择鉴别培养基——麦康凯平板或伊红美兰平板（EMB平板）。 培养后挑取可疑菌落作革兰染色及生化反应。生化反应包括 IMViC试验和乳糖发酵试验。大肠杆菌IMViC试验结果为+、+、—、— 大肠杆菌的鉴定主要靠形态和生化反应两方面的特征。 但由于大肠杆菌和产气杆菌在形态和生化反应方面有相似之处，而产气杆菌一般多存在于水中，无卫生学意义。因而检测大肠杆菌要与产气杆菌相鉴别。二者的鉴别一般采用IMViC试验（I——吲哚试验，M——甲基红试验，Vi——V．P．试验，C——椽枸酸盐利用试验）来鉴定。 如检测结果为革兰阴性杆菌，乳糖发酵阳性及IMViC试验符合，则可判断每克或每毫升