蛋白质性质试验.ppt

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实验 蛋白质的部分性质 一、试验原理 蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用,产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同,颜色反应亦不完全相同。颜色反应不是蛋白质的专一反应,一些非蛋白物质也可产生同样的颜色反应,因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。另外,颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。 二、实验仪器 1、吸管 2、滴管 3、试管 4、电炉 5、pH试纸 6、水浴锅 三、实验试剂 1、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍,3-4层纱布过滤,滤液放在冰箱里冷藏备用。 2、 0.5%苯酚:1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。 3、Millon’s试剂:40g汞溶于60ml浓硝酸(水浴加温助溶)溶解后,冷却,加二倍体积的蒸馏水,混匀,取上清夜备用。此试剂可长期保存。 4、尿素晶体 5、1%CuSO4:1g CuSO4晶体溶于蒸馏水,稀释至100ml 6、10%NaOH:10g NaOH溶于蒸馏水,稀释至100ml 7、浓硝酸 8、0.1%茚三酮溶液:0.1g茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml. 9、 冰醋酸 10、浓硫酸 四、实验步骤 (一)?? 米伦(Millon’s)反应 原理:米伦试剂是硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚硝酸汞的混合物。他能与苯酚及某些二羟基苯衍生物起颜色反应。组成蛋白质的氨基酸中只有酪氨酸含苯酚基团,因此该反应为蛋白质中酪氨酸存在的依据。 操作: 1、苯酚实验: 取0.5%苯酚溶液1ml于试管中,加Millon’s试剂0.5ml,于电炉上小心加热,溶液即出现玫瑰红色。 2、蛋白质实验: 取2ml蛋白液,加Millon’s试剂0.5ml,出现白色的蛋白质沉淀,小心加热,凝固的蛋白质出现红色。 (二)?? 双缩脲反应 原理:尿素被加热,则两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中,能与硫酸铜结合成紫色的化合物,此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似,故也能进行此反应。双缩脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。 操作: 1、取少量尿素晶体放在干燥的试管中,微火加热使其熔化成液体, 此时有氨气放出,可用湿润的试纸检验,至液体重新结晶出现白色固体时, 停止加热,冷却。然后加10%NaOH溶液1ml,摇匀,再加2-4滴1% CuSO4溶液,混匀,观察有无紫色出现。 2、取蛋白液1ml,加10%NaOH溶液1ml,摇匀,再加2-4滴1% CuSO4溶液,混匀,观察有无紫色出现。 (三)?? 黄色反应 原理:蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等),于浓硝酸可反应并生成黄色物质,此物质在碱性环境下变为桔黄色的硝基苯衍生物硝醌酸等。 操作:取一支试管,加入1ml蛋白液及浓硝酸5滴。加热,冷却后注意颜色变化。然后再加入10%NaOH溶液1ml,颜色有什么变化? (四)?? 茚三酮反应 原理:蛋白质与茚三酮共热,产生兰紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。此反应为一切蛋白质及a-氨基酸所共有。亚氨基酸(脯氨酸和羟脯氨酸)与茚三酮反应呈黄色,含有氨基的其他物质亦呈此反应。 操作:取蛋白液1ml于试管中,加4-8滴茚三酮溶液,加热至沸,即有蓝紫色出现。 第二部分、蛋白质的沉淀反应 一、试验原理 蛋白质是亲水性胶体,在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关,但其稳定性是有条件的,相对的。如果条件发生了变化,破坏了蛋白质的稳定性,蛋白质就会从溶液中沉淀出来。 二、实验仪器 1、移液管 2、吸管 3、试管 4、电炉 三、实验试剂 1、卵清蛋白液:鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍,3-4层纱布过滤,滤液放在冰箱里冷藏备用。 2、饱和硫酸铵溶液:100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。 3、硫酸铵晶体:用研钵研成碎末。 4、95%乙醇。 5、醋酸铅溶液:1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml 6、硫酸铜溶液:1g CuSO4晶体溶于蒸馏水,稀释至100ml 7、氯化钠晶体 8、10%三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml 9、饱和苦味酸溶液:100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。 10、1%醋酸溶液。 四、实验步骤 (一)蛋白质的盐析作用 原理:向蛋白质中加入大量的中性盐(硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等),使蛋白质胶体颗粒脱水,破坏其水化层,同时它所带有的电荷亦被中性盐上所带的相反电荷的离子所中和。于是稳定因素被破坏,蛋白质聚集沉淀。盐析作用一般不使蛋白质变性。 操作:1、取试管1支,加蛋白液2ml,然后加固体硫酸铵(加的过程要缓慢,加的量要少随时摇匀),直至其饱和(大约为50%)。摇匀静置数分钟,则有球蛋白析出。 2、将上述混合

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