血凝抑制试验.pptVIP

一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的原理和操作方法 2.熟悉正确判定试验结果并对结果进行分析。 二、实验试剂与器材 鸡红细胞 ：用生理盐水配成1%红细胞悬液 4个血凝单位鸡新城疫病毒 生理盐水 微量反应板、微量移液器、灭菌塑料吸头 三、操作步骤 （一）、血凝试验 在血凝板第一排的1-12孔加入25μl生理盐水。 在第1孔中加入25μl病毒，混匀后吸25μl到第2孔，如此倍比稀释直到第10孔，混匀后弃25μl；最后两孔（11、12）为血凝素和空白对照。 将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1-12孔中每孔加入25μl。 4.手工震荡，37℃静置30min (室温40分钟 )后观察结果 四、结果判定 效价判定： 凝集特别显著：“＋＋＋＋” 凝集现象次之：“＋＋＋” 凝集清楚可见：“＋＋” 稍显凝集者：“＋” 血凝效价：呈“＋＋”凝集时的最高稀释度。此时的稀释度即为1个血凝单位。 思考题 1、病毒凝集红细胞是不是一种特异的抗原体反应？为什么？ 2、血凝抑制实验是不是特异的抗原抗体反应? 为什么？ 3、为什么加病毒液和红细胞悬液时要反向加？ 4、血凝试验和血凝抑制试验中空白对照的意义？ 谢谢 * 血凝试验（HA） 和血凝抑制试验（HI） 申杨帆 刘永红 陈 泽 孙 鹏 符 贵 原理：血凝现象：有些病毒可凝集某些动物（如鸡、鹅、豚鼠、绵羊）和人的红细胞(RBC) 血 凝：血凝素与RBC表面相应受体结合，引起RBC凝集 血凝抑制试验：抗体与血凝素结合，封闭血凝素，使之不能与红细胞结合 37℃静置30min (室温40分钟 )后观察结果 25 x 25 12（-) 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 1%鸡红细胞 25 x 弃 11(+) 25 25 1024 10 25 25 25 25 25 25 25 25 25 血凝素 25 25 25 25 25 25 25 25 25 生理盐 512 256 128 64 32 16 8 4 2 稀释度 HA 9 8 7 6 5 4 3 2 1 孔号 （二）、血凝抑制试验 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 1%鸡红细胞 25 x 25 12（-) 25 x 25 12（-) 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 1%鸡红细胞 25 25 X 弃 11(+) 25 x 弃 11(+) 25 25 25 1024 10 25 25 1024 10 25 25 25 25 25 25 25 25 25 4个单位疫病毒 25 25 25 25 25 25 25 25 25 待检血清 25 25 25 25 25 25 25 25 25 生理盐 512 256 128 64 32 16 8 4 2 稀释度 H I 9 8 7 6 5 4 3 2 1 孔号 25 25 25 25 25 25 25 25 25 血凝素 25 25 25 25 25 25 25 25 25 生理盐 512 256 128 64 32 16 8 4 2 稀释度 HA 9 8 7 6 5 4 3 2 1 孔号 血凝试验用途：①确定病毒的含量； ②计算病毒的血凝价，为血凝抑制试验做准备 血凝价：能使血球产生50%凝集的病毒最高稀释度 五、临床意义 血凝抑制试验用途: ①用于检测血清中抗体含量； ②鉴定病毒的型、亚型； 血凝抑制价：能完全抑制血凝素的最高血清稀释度即为该血清的血凝抑制价 *