第一章 细胞遗传学技术.ppt

三、染色体显带技术 1、Q显带 1）特点： 荧光染料染色 1、9、16号染色体着丝粒区和Y染色体长臂部分区域荧光明显 2）优点：带纹清晰 3) 缺点: 试剂仪器价高,带纹易退色 2、G显带 1）特点： 胰酶处理、Giemsa染色、带纹与Q带相似 2）优点： 制作方便、费用低廉、标本易保存 3）缺点： 带纹不及Q显带清晰 3、C显带 着丝粒区深染 确定着丝粒数目和位置 1、9、16着丝粒区深染而大 Y染色体长臂部分深染 四、荧光原位杂交技术fluorescence in-situ hybridization, FISH 1、基本原理 指利用已进行荧光标记的探针与细胞、组织切片上的核酸进行杂交，检测特异序列的DNA或RNA。 它是在细胞遗传学、分子遗传学和免疫学相结合的基础上发展起来的一项技术。 2、探针标记的方法 直接法进行标记 间接法进行标记 3、 FISH技术的特点 ①操作操作简便,探针标记后稳定,一次标记后可使用二年. ②方法敏感,能迅速得到结果. ③在同一标本上,可同时检测几种不同探针. ④不仅可用于分裂期细胞染色体数量或结构变化的研究,而且还可用于间期细胞的染色体数量及基因改变的研究. 4、FISH在细胞遗传学中的应用 （1）重复序列的探针（卫星(satellite)探针） α卫星DNA探针主要检测人染色体的着丝粒 β卫星DNA位于端着丝粒染色体及各号染色体的异染色体质周围 经典卫星DNA(classic-saiellite DNA)位于染色体1、9、15、16和Y染色体长臂异染色质周围 临床应用： 羊水细胞可不培养直接筛查21三体Down氏综 合片）18三体（Edward综合征），13体（Patau 综合征），45、XO(Torner氏综合征)和47XXY（Klinfelter综合征）。 （2）单一序列探针 确定碱基突变、基因缺失、基因定位 （3）全染色体探针(whole chromosome painting probe,WCP) 又称染色体涂染探针 确定染色体结构畸变 染色体分析技术 一、选择分散程度较好、形态规整的分裂相。 能区分染色体的大小和着丝粒位置 二、对20-30个分裂相进行染色体计数。 对不同染色体数目的分裂相进行记录 辨别制片时染色体丢失还是核型异常 三、选择分裂相进行核型分析。 外周血淋巴细胞计数分析20个分裂相，分析5个核型，骨髓细胞分析20个核型。 染色体数目异常时，2个以上分裂相具有相同核型视为异常。 四、染色体检测报告 报告单位 姓名、性别、年龄 主要临床症状、本人有害有毒射线等接触史、亲属中流产和遗传病史 核型图 结果、分析者、复审者、日期 * 细胞遗传学技术 一、培养基 1、外周血淋巴细胞染色体制备培养基配制 新生小牛血清 20% RPMI1640基本培养基 80% 植物血球凝集素（PHA) 按说明配置 2、绒毛、羊水细胞培养基配置 胎牛血清 20% 1640、HamF10培养基原液 80% 二、细胞培养方法 1、人外周血淋巴细胞染色体制备 1）方法 静脉血0.3/5ml培养基 37℃培养72小时 收细胞前2-3小时加秋水仙素 制片，染色 2）特点 取材方便、方法稳定、易掌握和推广 3）意义 检查该个体体细胞核型 2、羊水细胞染色体制备 羊水细胞主要来自胎儿皮肤、胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道的粘膜上皮。 1）方法：培养15天左右 2）特点： （1）孕期为16-20周取材，B超监测取材，专人操作。 （2）培养15天左右 （3）方法复杂、设备较昂贵、成功率较低。 3）安全性： 流产率约1%左右 4) 意义：检测胎儿核型 3、绒毛细胞染色体制备 绒毛为受精卵经有丝分裂衍生出来