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质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳;实验目的;实验原理;实验器材和试剂;琼脂糖凝胶电泳;琼脂糖凝胶;琼脂糖凝胶的优点;缺点:
1.机械强度差,易破碎,浓度不能太低。
2.易被细菌污染,不易保存,临用前配制。
3.琼脂糖支持层上的区带易于扩散,电泳后必须立即固定染色。
4.与PAGE相比,分子筛作用小,区带少。 ;影响琼脂糖凝胶电泳的因素;上样缓冲液;;核酸电泳的染色剂;溴化乙锭(ethidium bromide,EB)
是一种荧光染料,EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间,在紫外线激发下,发出桔红色荧光
可在凝胶电泳液中加入终浓度为0.5ug/ml的EB,有时亦可在电泳后,将凝胶浸入该浓度的溶液中染色10~15min
EB染料有许多优点,如染色操作简便、快速,灵敏度高,10ng或更少的DNA即可检出。;银染色
银染色液中的银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物,然后用还原剂如甲醛使Ag+还原成银颗粒,可把核酸电泳带染成黑??色。
主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色,也用于琼脂糖凝胶染色。
灵敏度比EB高200倍,但银染色后,DNA不宜回收;实验操作;操作步骤;2. 配制1%琼脂糖凝胶及倒胶;3. 加样;4. 电泳;5. 结果观察;注意事项;THE EDD
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